本發(fā)明公開了目的基因轉(zhuǎn)化甜櫻桃的方法及其在甜櫻桃原生質(zhì)體瞬時轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用。本發(fā)明公開的甜櫻桃轉(zhuǎn)化方法包括：將甜櫻桃果肉愈傷組織進(jìn)行懸浮繼代培養(yǎng)，得到懸浮細(xì)胞；將懸浮細(xì)胞用CPW13M進(jìn)行處理，得到CPW13M處理的懸浮細(xì)胞，CPW13M為向細(xì)胞?原生質(zhì)體清洗液中加入甘露醇得到的甘露醇質(zhì)量百分比濃度為11％?15％的溶液；用纖維素酶和果膠酶酶解CPW13M處理的懸浮細(xì)胞得到甜櫻桃原生質(zhì)體；以甜櫻桃原生質(zhì)體為受體進(jìn)行甜櫻桃轉(zhuǎn)化。實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的甜櫻桃轉(zhuǎn)化方法可以將目的基因在甜櫻桃原生質(zhì)體中進(jìn)行瞬時表達(dá)，可以用來進(jìn)行目的基因的功能驗(yàn)證及蛋白質(zhì)和細(xì)胞器的定位，還可用來檢測蛋白質(zhì)互作及細(xì)胞代謝。

1.甜櫻桃轉(zhuǎn)化方法，包括以甜櫻桃原生質(zhì)體為受體進(jìn)行甜櫻桃轉(zhuǎn)化；所述甜櫻桃原生質(zhì)體為利用甜櫻桃果肉制備的原生質(zhì)體；利用甜櫻桃果肉制備原生質(zhì)體的方法包括：A1）將甜櫻桃果肉愈傷組織進(jìn)行懸浮繼代培養(yǎng)，得到懸浮細(xì)胞；A2）用纖維素酶和果膠酶酶解所述懸浮細(xì)胞得到所述甜櫻桃原生質(zhì)體；所述甜櫻桃果肉愈傷組織的制備方法包括：將甜櫻桃果肉在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)得到甜櫻桃果肉愈傷組織；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為向MS培養(yǎng)基中加入BA、2,4-D和蔗糖得到的固體培養(yǎng)基；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基中BA、2,4-D和蔗糖的濃度分別為2 mg/L、1 mg/L和3%；所述甜櫻桃果肉愈傷組織的制備方法還包括將所述甜櫻桃果肉愈傷組織在繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)；所述繼代培養(yǎng)基為向MS培養(yǎng)基中加入BA、2,4-D和蔗糖得到的固體培養(yǎng)基；所述繼代培養(yǎng)基中BA、NAA和蔗糖的濃度分別為3 mg/L、1.5 mg/L和3%所述甜櫻桃果肉為10-40 DAFB的甜櫻桃果實(shí)的果肉；所述將甜櫻桃果肉愈傷組織進(jìn)行懸浮繼代培養(yǎng)包括：將所述甜櫻桃果肉愈傷組織在懸浮系繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行懸浮繼代培養(yǎng)，得到懸浮細(xì)胞；所述懸浮系繼代培養(yǎng)基為向MS培養(yǎng)基中加入BA、NAA、維生素C和蔗糖得到的培養(yǎng)基；所述懸浮系繼代培養(yǎng)基中所述BA、所述NAA、所述維生素C和所述蔗糖的濃度分別為1.0 mg/L、0.3 mg/L、3 mg/L和質(zhì)量百分比濃度3%，pH為5.85。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述用纖維素酶和果膠酶酶解所述懸浮細(xì)胞前還包括將所述懸浮細(xì)胞用CPW13M進(jìn)行處理；所述CPW13M為向細(xì)胞-原生質(zhì)體清洗液中加入甘露醇得到的甘露醇的質(zhì)量百分比濃度為11%-15%的溶液。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：用所述CPW13M處理所述懸浮細(xì)胞的時間為0.5-2 h。4.根據(jù)權(quán)利要求3中任一所述的方法，其特征在于：所述A2）包括A21）和A22）：A21）用含有所述纖維素酶和所述果膠酶的酶液浸泡所述懸浮細(xì)胞，得到酶-原生質(zhì)體混合液；A22）將所述酶-原生質(zhì)體混合液加至CPW25S上，得到下層為CPW25S上層為酶-原生質(zhì)體混合液的分層液體1；將所述分層液體1進(jìn)行離心，使原生質(zhì)體位于所述分層液體1的界面處，分離原生質(zhì)體，得到所述甜櫻桃原生質(zhì)體；所述CPW25S為向所述細(xì)胞-原生質(zhì)體清洗液中加入蔗糖得到的溶液；所述CPW25S中蔗糖質(zhì)量百分比濃度為23%-27%。5.下述P1或P2的方法：P1、權(quán)利要求1-4中任一所述利用甜櫻桃果肉制備原生質(zhì)體的方法；P2、權(quán)利要求1-4中任一所述甜櫻桃果肉愈傷組織的制備方法。6.下述M1或M2的產(chǎn)品：M1、用于制備甜櫻桃原生質(zhì)體的成套試劑，為權(quán)利要求4中所述CPW13M、所述CPW25S、所述細(xì)胞-原生質(zhì)體清洗液、所述纖維素酶、所述果膠酶、所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基和所述繼代培養(yǎng)基；M2、用于誘導(dǎo)甜櫻桃果肉愈傷組織的成套試劑，為權(quán)利要求1中所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基和所述繼代培養(yǎng)基。7.下述任一應(yīng)用：X1、權(quán)利要求1-4中任一所述甜櫻桃轉(zhuǎn)化方法在甜櫻桃中瞬時表達(dá)目的基因中的應(yīng)用；X2、權(quán)利要求1-4中任一所述利用甜櫻桃果肉制備原生質(zhì)體的方法在甜櫻桃中瞬時表達(dá)目的基因中的應(yīng)用；X3、權(quán)利要求1-4中任一所述甜櫻桃果肉愈傷組織的制備方法在甜櫻桃中瞬時表達(dá)目的基因中的應(yīng)用；X4、權(quán)利要求6所述產(chǎn)品在甜櫻桃中瞬時表達(dá)目的基因中的應(yīng)用；X5、權(quán)利要求1-4中任一所述甜櫻桃轉(zhuǎn)化方法在植物基因功能驗(yàn)證中的應(yīng)用；X6、權(quán)利要求1-4中任一所述利用甜櫻桃果肉制備原生質(zhì)體的方法在植物基因功能驗(yàn)證中的應(yīng)用；X7、權(quán)利要求1-4中任一所述甜櫻桃果肉愈傷組織的制備方法在植物基因功能驗(yàn)證中的應(yīng)用；X8、權(quán)利要求6所述產(chǎn)品在植物基因功能驗(yàn)證中的應(yīng)用；X9、權(quán)利要求1-4中任一所述甜櫻桃果肉愈傷組織的制備方法在制備甜櫻桃原生質(zhì)體的中的應(yīng)用；X10、權(quán)利要求1-4中任一所述甜櫻桃果肉愈傷組織的制備方法在甜櫻桃轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用；X11、權(quán)利要求1-4中任一所述利用甜櫻桃果肉制備原生質(zhì)體的方法在制備甜櫻桃原生質(zhì)體的中的應(yīng)用。