一種高特異性的葉酸完全抗原合成方法及其應用，屬于生物化工技術領域。本發明是在載體蛋白溶液中加入6?氨基己酸與水溶性碳二亞胺后室溫下反應，透析后得到修飾了連接臂的載體蛋白B。葉酸（N?{4?[(2?氨基?1,4?二氫?4?氧代?6?喋啶)甲氨基]苯甲酰基}?L?谷氨酸）溶解于二甲亞砜，加入二環己基碳二亞胺與羥基琥珀酰亞胺，反應生成葉酸衍生物，再與載體蛋白B連接臂上的氨基進行偶聯，得到完全抗原。結果表明，用本發明的抗原免疫動物得到的抗血清效價達81000，檢測限0.042ng/mL，半抑制濃度0.3ng/mL。產生的抗體特異性高、靈敏度高。本發明的抗原或抗體用于免疫親和柱的制備及建立酶聯免疫吸附分析方法和膠體金試紙快速檢測法，用于檢測葉酸殘留。

1.一種高特異性的葉酸完全抗原合成方法，其特征在于步驟為：在載體蛋白溶液中加
入6-氨基己酸ε-ACA與水溶性碳二亞胺EDC，在室溫下反應，透析后得到修飾了連接臂的載
體蛋白B；將葉酸N-{4-[(2-氨基-1,4-二氫-4-氧代-6-喋啶)甲氨基]苯甲酰基}-L-谷氨酸
溶解于二甲亞砜DMSO中，加入二環己基碳二亞胺DCC與N-羥基丁二酰亞胺NHS，反應生成葉
酸衍生物，再加入修飾了連接臂的載體蛋白B，調節反應pH值8.5，與載體蛋白B上的氨基進
行偶聯，透析，得到高特異性的葉酸完全抗原。
2.根據權利要求1所述高特異性的葉酸完全抗原合成方法，其特征在于：所述載體蛋白
為牛血清白蛋白BSA或雞卵清白蛋白OVA。
3.根據權利要求1所述高特異性的葉酸完全抗原合成方法，其特征在于具體步驟如下：
（1）修飾載體蛋白：取載體蛋白50mg溶解于5mL pH9.6碳酸鹽緩沖溶液中，再加入100mg
6-氨基己酸，30mg水溶性碳二亞胺；調節體系pH值于6~8，室溫下反應4h；用PBS緩沖液透析2
天，期間換水4次，即得到修飾了連接臂的載體蛋白B；
（2）葉酸完全抗原的制備：
取25mg葉酸，加入2.5mL DMSO溶解，調節pH值為7.4，再分別加入10mg N-羥基丁二酰亞
胺NHS，23mg DCC，室溫下避光混勻，攪拌反應4h，將步驟（1）制備的修飾了連接臂的載體蛋
白B 100mg加入反應液中，調節pH值為8.5，在室溫25℃下避光反應2h；用PBS緩沖液透析2
天，期間換水4次，即得到葉酸完全抗原。
4.權利要求1所述高特異性的葉酸完全抗原的應用，其特征在于：通過葉酸完全抗原化
合物免疫動物得到多克隆抗體或單克隆抗體，并應用于檢測葉酸中。