1.一種制備用于微生物法定量檢測葉酸的微孔板的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：1)活化鼠李糖乳桿菌，將活化后的鼠李糖乳桿菌菌株接種到乳桿菌肉湯培養基中，35-39℃培養20-24h，2000轉/min離心2-3min，棄去上清液；2)加入9-11ml蔗糖和氯化鈣混合液，混勻后離心2-3min，棄去上清液，重復前述操作一次，然后再加入9-11ml蔗糖和氯化鈣混合液，混勻，制得菌懸液；吸1-2ml菌懸液至9-11ml蔗糖和氯化鈣混合液中，混勻制成測試菌液；3)將所述測試菌液2-8μl添加至微孔板各孔中，分別在24-26mTorr、49-51mTorr、495-505mTorr、4-6Torr、49-51Torr、195-205Torr的低真空環境下加熱測試菌液，使測試菌液在29-31℃的溫度條件下沸騰而產生泡沫，并在所述低真空環境和室溫下蒸發干燥24-48h，其中，所述鼠李糖乳桿菌菌株為鼠李糖乳桿菌ATCC7469，并且步驟2)中蔗糖和氯化鈣混合液中，各自的濃度分別為195-205mM、9-11mM。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)中的活化鼠李糖乳桿菌采用活化方式為：將10g脫脂奶粉加入90ml蒸餾水中，混勻，115℃滅菌15分鐘，即為液體培養基；將0.2-0.3g粉末鼠李糖乳桿菌菌株加入10ml所述液體培養基中，36-38℃培養直至凝乳，得凝乳狀菌種，放置于0-4℃保存；將0.2-0.3ml上步驟中培養好的凝乳狀菌種加入10ml所述液體培養基中，36-38℃培養直至凝乳；重復幾次上一步驟，不同的是每次使用的菌種均是上一步驟獲得的培養物，待凝乳時間穩定后表明菌種已活化好。3.一種由權利要求1或2所述的方法制備的微孔板。4.一種包含權利要求3所述的微孔板的試劑盒。5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，其還包含葉酸標準品、葉酸測試培養基以及無菌水。6.根據權利要求4或5所述的試劑盒，其特征在于，所述葉酸測試培養基為10.0g/L活性碳處理的胰腺消化酪蛋白、40.0g/L葡萄糖、40.0g/L醋酸鈉、1.0g/L磷酸二氫鉀、1.0g/L磷酸氫二鉀、0.6g/L L-天冬氨酸、0.5g/L L-鹽酸半胱氨酸、0.2g/L無水硫酸鎂、0.2g/L DL-色氨酸、0.1g/L聚山梨醇酯-80、20.0mg/L黃嘌呤、20mg/L氯化鈉、20.0mg/L硫酸亞鐵、15.0mg/L硫酸錳、10.0mg/L硫酸腺嘌呤、10.0mg/L鹽酸鳥嘌呤、10.0mg/L尿嘧啶、5.0mg/L還原型谷胱甘肽、2.0mg/L對氨基苯甲酸、1.0mg/L核黃素、800μg/L泛酸鈣、800μg/L煙酸、400μg/L鹽酸硫胺素、20μg/L生物素。7.一種制備權利要求4-6中任意一項所述的試劑盒的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：先制備包被有鼠李糖乳桿菌菌株的微孔板：1)活化鼠李糖乳桿菌，將活化后的鼠李糖乳桿菌菌株接種到乳桿菌肉湯培養基中，35-39℃培養20-24h，2000轉/min離心2-3min，棄去上清液；2)加入9-11ml蔗糖和氯化鈣混合液，混勻后離心2-3min，棄去上清液，重復前述操作一次，然后再加入9-11ml蔗糖和氯化鈣混合液，混勻，制得菌懸液；吸1-2ml菌懸液至9-11ml蔗糖和氯化鈣混合液中，混勻制成測試菌液；3)將所述測試菌液2-8μl添加至微孔板各孔中，分別在24-26mTorr、49-51mTorr、495-505mTorr、4-6Torr、49-51Torr、195-205Torr的低真空環境下加熱測試菌液，使測試菌液在29-31℃的溫度條件下沸騰而產生泡沫，并在所述低真空環境和室溫下蒸發干燥24-48h，從而制得定量檢測葉酸用微孔板，其中，所述鼠李糖乳桿菌菌株為鼠李糖乳桿菌ATCC7469，并且步驟2)中蔗糖和氯化鈣混合液中，各自的濃度分別為195-205mM、9-11mM；然后制備葉酸標準品及葉酸測試培養基。
展開
