本發(fā)明公開了一種牛腸粘膜依諾肝素鈉及其制備方法與應(yīng)用。牛腸粘膜依諾肝素鈉由牛腸粘膜肝素制備而來，與USP39和EP8.6等藥典規(guī)定的由豬腸粘膜肝素來源的依諾肝素鈉不同，其呈現(xiàn)出典型的物種和器官來源（牛腸粘膜）特征。本發(fā)明同時介紹了兩種牛腸粘膜依諾肝素鈉注射劑和制備方法，以及在動物體內(nèi)抗凝試驗(yàn)的應(yīng)用。牛腸粘膜依諾肝素鈉還具有豬來源依諾肝素鈉所不具有的清真性，在廣大穆斯林人群、國家和地區(qū)，有著巨大的市場。牛腸粘膜依諾肝素鈉及其注射劑，可應(yīng)用于抗凝、抗栓、抗炎、抗癌及清真藥物。

1.一種牛腸粘膜依諾肝素鈉的制備方法，其特征在于：
取巴西市售的牛腸粘膜肝素鈉，經(jīng)全綿羊血漿法抗凝活性折干后為156.3單位每毫克；
按USP39規(guī)定的精品肝素鈉抗-Ⅹa和抗-Ⅱa活性測定方法，抗-Ⅹa活性折干后僅為120.1單
位每毫克，抗-Ⅱa活性折干后為93.0單位每毫克，抗-Ⅹa/抗-Ⅱa比例為1.29；
準(zhǔn)確稱取上述牛腸粘膜肝素鈉80克，溶解于800毫升水中；另將200克芐索氯銨，溶解于
800毫升水中，配制成澄清的芐索氯銨水溶液；于充分?jǐn)嚢柘拢瑢⑵S索氯銨水溶液滴加至牛
腸粘膜肝素鈉水溶液中，30分鐘內(nèi)滴加完畢，繼續(xù)攪拌2小時，用高速離心機(jī)6000轉(zhuǎn)/分鐘離
心5分鐘，沉淀用1600毫升水重懸，繼續(xù)充分?jǐn)嚢?分鐘，再6000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，重復(fù)一
次，沉淀的牛腸粘膜肝素季銨鹽，45℃鼓風(fēng)干燥10小時后，轉(zhuǎn)移至真空干燥箱，在60℃下真
空干燥48小時，干燥后的牛腸粘膜肝素季銨鹽的干燥失重為0.5％，稱重為232.5克；
取上述干燥后的牛腸粘膜肝素季銨鹽200克于2升反應(yīng)瓶中，加入1300克二氯甲烷攪拌
溶解，升溫至38℃，加入220克氯化芐，全程保溫30-40℃，反應(yīng)過夜，轉(zhuǎn)移反應(yīng)液至5升瓶；另
外，稱量160克醋酸鈉，溶解于1600毫升的甲醇中，在酯化反應(yīng)結(jié)束后滴加至反應(yīng)液中，此時
產(chǎn)生不溶的牛腸粘膜肝素芐基酯沉淀，再加入3升甲醇，攪拌5分鐘，靜置過夜，小心地吸去
上清液，下層沉降區(qū)混合物，用100目濾布抽濾，得到牛腸粘膜肝素芐基酯粗品；粗品再兩次
以1.6升甲醇重懸，充分?jǐn)嚢柘礈旌蟪闉V；稱取20克氯化鈉并溶于160毫升水中，用該氯化鈉
水溶液溶解上述固體，再以1.6升的甲醇醇沉，沉淀物以離心機(jī)6000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘收
獲；重復(fù)鹽水溶再甲醇醇沉3次，沉淀轉(zhuǎn)移至真空干燥箱，60℃真空干燥50小時，所得的牛腸
粘膜肝素芐基酯稱重60.2克，干燥失重為3.3％，酯化度折干后為12.8％；
取上述牛腸粘膜肝素芐基酯50克，溶于1.25升水中，加熱至60℃，保溫60±1℃30分鐘
以上；另外準(zhǔn)確稱取6.25克50％氫氧化鈉溶液，加入上述保溫的水溶液中，繼續(xù)攪拌保溫60
±2℃，反應(yīng)90分鐘，將反應(yīng)液冷卻至室溫，加入25克30％雙氧水，氧化脫色30分鐘；用稀鹽
酸調(diào)pH至7.0，0.22微米過濾反應(yīng)液，濾液加125克氯化鈉，攪拌確保氯化鈉全溶，調(diào)pH至
6.0，再0.22微米精過濾；加入3升甲醇醇沉，沉淀物經(jīng)400目過濾；沉淀物再以3升甲醇重懸
攪拌30分鐘，抽濾取沉淀；沉淀溶于120克水后，轉(zhuǎn)移至凍干瓶，真空凍干30小時；凍干粉稱
重后裝袋，密封送檢。