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治療缺血性疾病的臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞注射液及其制備方法

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-12-21
  • 技術(shù)成熟度:通過小試
交易價(jià)格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實(shí)
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào) CN201910366815.4 
  • 技術(shù)(專利)名稱 治療缺血性疾病的臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞注射液及其制備方法 
  • 項(xiàng)目單位 南京鼓樓醫(yī)院
  • 發(fā)明人 丁利軍,孫海翔,徐璐,李一凡 
  • 行業(yè)類別 藥品-生物藥品
  • 技術(shù)成熟度 通過小試
  • 交易價(jià)格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 周青楊
  • 發(fā)布時(shí)間 2021-12-21  
  • 01

    項(xiàng)目簡(jiǎn)介

    本發(fā)明公開了一種治療缺血性疾病的臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞注射液及其制備方法,包括懸浮的臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞和溶劑。溶劑可以為富含血小板的臍帶血漿或含有人血清白蛋白的注射用PBS。其制備方法為臍帶動(dòng)脈組織培養(yǎng)后衍生出動(dòng)脈旁干細(xì)胞,酶解法消化獲得單個(gè)所述臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞,經(jīng)PBS洗滌兩次后,再與溶劑輕輕混勻,獲得臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞注射液。該細(xì)胞取自醫(yī)療廢棄物臍帶,具有易分離、增殖速度快、免疫原性低的特性。含5%人血清白蛋白的PBS或富含血小板的臍帶血漿重懸臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞后制備成注射懸液,懸液注射后顯著改善下肢缺血模型小鼠的血流供應(yīng)。
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  • 02

    說明書

    1.一種治療缺血性疾病的臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞注射液,其特征在于:包括懸浮的臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞和溶劑。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療缺血性疾病的臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞注射液,其特征在于:其中,所述溶劑為富含血小板的臍帶血漿。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的治療缺血性疾病的臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞注射液,其特征在于:其中,所述臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞的含量為5×106/mL。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療缺血性疾病的臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞注射液,其特征在于:其中,所述溶劑為含有人血清白蛋白的注射用PBS。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的治療缺血性疾病的臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞注射液,其特征在于:其中,所述臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞的含量為5×106/mL;人血清白蛋白的含量為PBS體積的5%。6.如權(quán)利要求2所述的治療缺血性疾病的臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞注射液的制備方法,其特征在于:臍帶動(dòng)脈組織培養(yǎng)后衍生出動(dòng)脈旁干細(xì)胞,酶解法消化獲得單個(gè)所述臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞,經(jīng)PBS洗滌兩次后,再與所述富含血小板的臍帶血漿輕輕混勻,獲得臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞注射液。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的治療缺血性疾病的臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞注射液,其特征在于:其中,所述臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞的制備過程為:足月生產(chǎn)后取新鮮人臍帶7-15cm,4h內(nèi)用含有10%青鏈雙抗和1%肝素的PBS冰上4℃運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室;在超凈工作臺(tái)內(nèi)取出臍帶,擠出臍帶中的血,PBS反復(fù)沖洗直至無血液和血塊后,剪刀修齊兩斷面,沿臍帶內(nèi)血管長(zhǎng)軸方向剪開臍帶,用鑷子鈍性分離臍帶動(dòng)脈;將臍帶動(dòng)脈沿與臍帶動(dòng)脈垂直方向剪碎至1-2mm3大小組織塊,組織塊均勻鋪于100mm細(xì)胞培養(yǎng)皿底,放置于5%CO2、37℃飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)3h;然后緩慢加入5ml DMEM-LG培養(yǎng)基至100mm皿中,輕放置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng);第一周第3天和第7天各加DMEM-LG培養(yǎng)基3ml、2ml,之后第二周半量換液2次,之后第三周全量換液2次,期間觀察組織塊周圍貼壁細(xì)胞爬出情況;3周后細(xì)胞長(zhǎng)到80%融合時(shí)去除臍帶動(dòng)脈組織塊,0.05%胰酶消化,傳代培養(yǎng);取P3-P5代細(xì)胞用于注射懸液制備。8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的治療缺血性疾病的臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞注射液,其特征在于:其中,所述富含血小板的臍帶血漿的制備方法為:在50mL離心管中加入750IU肝素鈉收集臍帶血40mL;在室溫下200g低速離心10-15min,收集上層液體;對(duì)所述上層液體再次2000g高速離心10min,血小板沉積離心管底部,棄去部分上清血漿,留200uL血漿及底部沉積的血小板,輕輕重懸獲得富含血小板的臍帶血漿。9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的治療缺血性疾病的臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞注射液,其特征在于:其中,獲得的臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞的單細(xì)胞懸液,使用不含鈣、鎂的PBS洗滌2次,然后細(xì)胞沉淀采用所述富含血小板的臍帶血漿加以重懸,輕輕混勻制成臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞注射液;所述臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞注射液放于4℃短暫儲(chǔ)存,12h內(nèi)使用,使用前輕輕搖勻。10.如權(quán)利要求4所述的治療缺血性疾病的臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞注射液的制備方法,其特征在于:臍帶動(dòng)脈組織培養(yǎng)后衍生出動(dòng)脈旁干細(xì)胞,酶解法消化獲得單個(gè)所述臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞,使用不含鈣、鎂的PBS洗滌兩次,然后細(xì)胞沉淀采用含有5%人血清白蛋白的PBS加以重懸,輕輕混勻制成臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞注射液;所述臍帶動(dòng)脈旁干細(xì)胞注射液放于4℃短暫儲(chǔ)存,12h內(nèi)使用,使用前輕輕搖勻。
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專利技術(shù)附圖

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