本發(fā)明公開(kāi)了一種用于多重連接擴(kuò)增技術(shù)的長(zhǎng)探針的制備方法，包括以下步驟：1)與待檢測(cè)靶片段無(wú)關(guān)的模板核苷酸序列選擇，并根據(jù)UT和目標(biāo)核苷酸序列設(shè)計(jì)引物；2)人工合成引物；3)PCR擴(kuò)增；4)PCR產(chǎn)物與親和素磁珠混合；5)PCR產(chǎn)物變性解鏈；6)分離非生物素標(biāo)記的單鏈核苷酸序列，即得到可用于多重連接擴(kuò)增技術(shù)的長(zhǎng)探針。本發(fā)明所述MLPA長(zhǎng)探針的制備方法利用簡(jiǎn)單的PCR擴(kuò)增和親和素磁珠結(jié)合過(guò)程即可獲得MLPA長(zhǎng)探針，操作步驟簡(jiǎn)單容易，避免了進(jìn)行噬菌體感染等獲取長(zhǎng)探針的耗時(shí)長(zhǎng)且復(fù)雜的操作過(guò)程，大大降低了進(jìn)行MLPA技術(shù)應(yīng)用的門檻，使得普通的實(shí)驗(yàn)室也能順利地進(jìn)行該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。

1.用于多重連接擴(kuò)增技術(shù)的長(zhǎng)探針的制備方法，包括以下步驟：
1)針對(duì)目標(biāo)核苷酸序列和用于制備長(zhǎng)探針的與待檢測(cè)靶片段無(wú)關(guān)
的模板核苷酸序列設(shè)計(jì)一對(duì)PCR擴(kuò)增引物，分別為通用引物和檢測(cè)引物；
所述檢測(cè)引物由兩段核苷酸序列組成，一段根據(jù)目標(biāo)核苷酸序列設(shè)計(jì)，
另一段根據(jù)與待檢測(cè)靶片段無(wú)關(guān)的模板核苷酸序列設(shè)計(jì)；
2)在通用引物的5’端標(biāo)記生物素；
3)以所述與待檢測(cè)靶片段無(wú)關(guān)的模板核苷酸序列為模板進(jìn)行PCR
擴(kuò)增，獲得生物素標(biāo)記的雙鏈核苷酸序列；
4)將所述生物素標(biāo)記的雙鏈核苷酸序列與親和素磁珠混合；
5)使生物素標(biāo)記的雙鏈核苷酸序列變性，解鏈形成單鏈；
6)離心，取上清，獲得非生物素標(biāo)記的單鏈核苷酸序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可用于多重連接擴(kuò)增技術(shù)的長(zhǎng)探針的制
備方法，其特征在于：步驟4)所述PCR擴(kuò)增得到的生物素標(biāo)記的雙鏈
核苷酸序列經(jīng)過(guò)純化后再與親和素磁珠混合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可用于多重連接擴(kuò)增技術(shù)的長(zhǎng)探針的制
備方法，其特征在于：所述每1份重量份生物素標(biāo)記的雙鏈核苷酸序列
與10份重量份的親和素磁珠混合。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可用于多重連接擴(kuò)增技術(shù)的長(zhǎng)探針的制
備方法，其特征在于：步驟5)所述生物素標(biāo)記的雙鏈核苷酸序列加熱
變性或者在堿性條件下變性。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可用于多重連接擴(kuò)增技術(shù)的長(zhǎng)探針的制
備方法，其特征在于：所述步驟6)的離心條件為4℃，轉(zhuǎn)速10,000rpm，
離心30sec。