本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及高通量篩選領(lǐng)域，涉及一種基于靶蛋白親和選擇的活性成分或活性成分群的高通量篩選方法，本發(fā)明通過(guò)將靶蛋白與待測(cè)化合物在緩沖液中孵育，孵育得到的混合溶液上樣于分子排阻色譜柱或在線固相提取柱，緩沖液洗脫，洗脫液經(jīng)解離，解離液再經(jīng)在線固相提取柱分離，最后導(dǎo)入高效液相—質(zhì)譜系統(tǒng)進(jìn)行分析，進(jìn)行化合物結(jié)構(gòu)確證，并對(duì)其進(jìn)行定量分析，計(jì)算這些活性成分對(duì)于靶蛋白的結(jié)合率，以評(píng)價(jià)其活性。本發(fā)明的篩選方法大大提高了從化合物群中篩選活性成分(群)的效率，是一種操作相對(duì)簡(jiǎn)單，成本較低的高通量藥物篩選方法。

1.一種基于靶蛋白親和選擇的活性成分高通量篩選方法，包括：篩選活性化合物，將篩選到
的活性化合物導(dǎo)入高效液相-質(zhì)譜系統(tǒng)進(jìn)行分析，進(jìn)行化合物結(jié)構(gòu)確證，并對(duì)其進(jìn)行定量分
析，計(jì)算這些活性成分對(duì)于靶蛋白的結(jié)合率，評(píng)價(jià)其活性，其特征是篩選活性化合物包括如
下步驟：
a、將靶蛋白與待測(cè)化合物在緩沖液中共孵育，孵育溶液上樣于分子排阻色譜柱或在線固
相提取柱，用緩沖液洗脫柱子，洗脫液流經(jīng)紫外檢測(cè)器，在吸收波長(zhǎng)280nm下檢測(cè)并收集首
先出峰的洗脫液；
b、將洗脫液與解離液混合進(jìn)行解離，解離溶液上樣于在線固相提取柱，靶蛋白和緩沖鹽
流出柱子，而活性成分保留在在線固相提取柱上；
c、洗脫b步驟得到的保留活性成分的在線固相提取柱，洗脫液進(jìn)入高效液相-質(zhì)譜系統(tǒng)
進(jìn)行分析；
其中緩沖液選自pH6.0～8.0的磷酸鹽緩沖液、pH6.0～8.0的三羥甲基氨基甲烷緩沖液、
pH6.0～8.0乙酸銨緩沖液或pH6.0～8.0碳酸氫銨緩沖液；
孵育緩沖液中還含有增溶劑，所述增溶劑選自吐溫、二甲基亞砜、聚乙二醇、曲拉通、
甲醇、乙醇中的一種或幾種。
2.權(quán)利要求1的高通量篩選方法，還包括用質(zhì)譜方法對(duì)篩選到的活性成分進(jìn)行活性評(píng)價(jià)。
3.權(quán)利要求1的高通量篩選方法，其中待測(cè)化合物是單體化合物、由單體化合物組成的化合
物群或含有未知成分的中藥提取物。
4.權(quán)利要求1的高通量篩選方法，其中分子排阻色譜柱填料選自Sephadex?G-25、Sephadex
G-50或Sephadex?LH-20，洗脫流速0.3-0.5ml/min。
5.權(quán)利要求1的高通量篩選方法，其中在線固相提取柱選自O(shè)asis?MCX在線色譜柱、Oasis
WCX在線色譜柱、Oasis?MAX在線色譜柱、Oasis?WAX在線色譜柱或Oasis?HLB在線色譜柱。
6.權(quán)利要求1的高通量篩選方法，其中在線固相提取柱洗脫流速是2-4ml/min。
7.權(quán)利要求1的高通量篩選方法，其中解離液是酸水溶液或酸水溶液與有機(jī)試劑的混合溶液，
所述酸水溶液選自三氟乙酸、甲酸、乙酸或鹽酸，pH為1-3；所述有機(jī)試劑選自甲醇或乙腈。