本發明涉及一種α-地中海貧血熒光定量PCR檢測試劑盒。該試劑盒包括用于檢測SEA、4.2和3.7型缺失的探針、用于擴增SEA、4.2和3.7型缺失的上游引物以及下游引物、PCR緩沖液和酶混合液。該試劑盒操作簡便，靈敏度高，并可預防PCR產物污染，具有很好的特異性、重復性和穩定性，利用該試劑盒進行α-地中海貧血熒光定量PCR檢測，可以確定外周血樣本中α-地中海貧血的缺失類型，可為靈敏、早期診斷α-地中海貧血缺失類型提供可靠的實驗證據。

1.一種α-地中海貧血熒光定量PCR檢測試劑盒，其包括3種PCR反應液，所述3種PCR
反應液中均含有用于靶多核苷酸擴增和檢測的引物和探針，其中，
PCR反應液Ⅰ：含有源于人基因組16號染色體α1和α2基因的保守區域的用于檢測α-地
中海貧血SEA缺失的引物和探針，且所述引物和探針的序列為，
上游引物α-SEA-F：5’-TCAGCCACCCGCAGACCAAGACCTA-3’；
下游引物α-SEA-R：5’-AGACAGCGTCACCCTCAGAGCCAT-3’；
探針α-SEA-P：5’-AAATGGATGAGGACGGAGCGATCTG-3’；
PCR反應液Ⅱ：含有源于人基因組16號染色體α1基因的保守區域的用于檢測α-地中海
貧血3.7缺失的引物和探針，且所述引物和探針的序列為，
上游引物α-3.7-F：5’-GGGGTGTCACAGTGAACCACGACC-3’；
下游引物α-3.7-R：5’-GCCCCTGCCTTTTCCTACCCTATCC-3’；
探針α-3.7-P：5’-TGCGTCCTGGTGTTTGTTCCTTCCC-3’；
PCR反應液Ⅲ：含有源于人基因組16號染色體α2基因的保守區域的用于檢測α-地中海
貧血4.2缺失的引物和探針，且所述引物和探針的序列為，
上游引物α-4.2-F：5’-GGCAGCCTTGGGCAACCTGTCTAC-3’；
下游引物α-4.2-R：5’-GGGCGGCTCCAGATTCAGACTCCT-3’；
探針α-4.2-P：5’-GCAGCCTTGGGCAACCTGTCTAC-3’。
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，對所述探針α-SEA-P、探針α-3.7-P和探
針α-4.2-P中至少一個的羧基端用熒光素標記，并對羥基端猝滅基團修飾，其中所述熒光素
包括FAM、TET、JOE、HEX，所述猝滅基團包括BHQ1、DABCYL、TAMRA、BHQ2、
BHQ3。
3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述熒光素為FAM，所述猝滅基團包
括BHQ1。
4.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述3種PCR反應液中均含有PCR
反應緩沖液、脫氧核糖核苷三磷酸、脫氧尿嘧啶核苷三磷酸及參比染料。
5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，每種所述PCR反應液中包含10×PCR反
應緩沖液，0.1～0.4mmol/L脫氧核糖核苷三磷酸，0.1～0.4mmol/L脫氧尿嘧啶核苷三磷酸，
40～200mmol/L參比染料，0.2～0.4μmol/L用于靶多核苷酸擴增的上下游引物和0.2～
0.4μmol/L用于靶多核苷酸檢測的探針。
6.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括酶混合液和α-地
中海貧血陰性對照。
7.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括酶混合液和α-地中
海貧血陰性對照。
8.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括酶混合液和α-地中
海貧血陰性對照。
9.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括裂解液、蛋白
酶K溶液、吸附柱、漂洗液、緩沖液Ⅰ、緩沖液Ⅱ、緩沖液Ⅲ；其中，所述緩沖液I為緩沖
液GB，所述緩沖液II為緩沖液GD，所述緩沖液III為緩沖液TB。
10.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括裂解液、蛋白酶K
溶液、吸附柱、漂洗液、緩沖液I、緩沖液II、緩沖液III；其中，所述緩沖液I為緩沖液GB，
所述緩沖液II為緩沖液GD，所述緩沖液III為緩沖液TB。
11.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括裂解液、蛋白酶K
溶液、吸附柱、漂洗液、緩沖液I、緩沖液II、緩沖液III；其中，所述緩沖液I為緩沖液GB，
所述緩沖液II為緩沖液GD，所述緩沖液III為緩沖液TB。
12.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括裂解液、蛋白酶K
溶液、吸附柱、漂洗液、緩沖液I、緩沖液II、緩沖液III；其中，所述緩沖液I為緩沖液GB，
所述緩沖液II為緩沖液GD，所述緩沖液III為緩沖液TB。