本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種幽門螺桿菌分型檢測(cè)的試劑盒。本發(fā)明所述試劑盒包括轉(zhuǎn)印有經(jīng)電泳分離的幽門螺桿菌全菌體蛋白的印跡膜。本發(fā)明采用免疫印跡法檢測(cè)幽門螺桿菌感染者血清中包括致病因子細(xì)胞毒(CagA)、空泡毒(VacA)和尿素酶亞單位A和B抗體等多種Hp抗體，依據(jù)HP抗體不同確定感染的HP是否產(chǎn)毒株，進(jìn)而判斷患者所感染Hp菌株血清學(xué)類型。本發(fā)明所述試劑盒僅需要待檢者提供血清，屬于非侵入性檢查，患者依從性較好，而且檢測(cè)快速，整個(gè)時(shí)間僅需2小時(shí)，樣品需求量小，僅需10微升被檢血清，特異性強(qiáng)，敏感性高，適用范圍廣，便于在各級(jí)醫(yī)院、衛(wèi)生部門推廣使用。

1.一種幽門螺桿菌分型檢測(cè)的方法，其特征在于，待測(cè)樣品與印跡膜進(jìn)
行酶聯(lián)免疫反應(yīng)，然后與陽性對(duì)照、陰性對(duì)照及標(biāo)準(zhǔn)帶比較；其中所述印跡
膜轉(zhuǎn)印有經(jīng)電泳分離的幽門螺桿菌全菌體蛋白；所述酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的酶為
辣根過氧化物酶，酶底物為3,3`,5,5`-四甲基聯(lián)苯胺。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述印跡膜的制備方法為取
HP全菌體蛋白用樣品緩沖液稀釋，利用SDS-聚丙稀酰胺凝膠梯度不連續(xù)電
泳將各種蛋白組分按分子量大小分開，然后利用濕轉(zhuǎn)法將HP全菌體蛋白由凝
膠層中轉(zhuǎn)移到固體支持物上即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述方法，其特征在于，所述酶聯(lián)免疫反應(yīng)具體
包括如下步驟：
步驟a、待測(cè)樣品與洗滌液混合后滴加到印跡膜上孵育；
步驟b、洗滌液洗滌印跡膜；
步驟c、酶標(biāo)記抗體與洗滌液混合后滴加到印跡膜上孵育；
步驟d、洗滌液洗滌印跡膜；
步驟e、將酶底物滴加到印跡膜上顯色，水洗終止反應(yīng)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于，所述酶標(biāo)記抗體為酶標(biāo)記的
抗人IgG抗體。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于，所述洗滌液為磷酸鹽緩沖液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述陽性對(duì)照為HP細(xì)胞毒
素蛋白抗體、HP空泡毒素蛋白抗體和尿素酶抗體的混合溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述陰性對(duì)照為正常人HP
抗體陰性血清。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述標(biāo)準(zhǔn)帶為標(biāo)示HP細(xì)胞
毒、HP空泡毒和尿素酶蛋白距起始線的相對(duì)位置的條帶。
9.根據(jù)權(quán)利要求1任意一項(xiàng)所述方法，其特征在于，所述方法具體包括
如下步驟：
步驟1、使用鑷子將所需數(shù)量的印跡膜放到反應(yīng)槽中，加入1×洗滌液1mL
和待檢樣品10μL，置搖床上室溫?fù)u動(dòng)30min或置37℃溫箱30min；
步驟2、棄去反應(yīng)槽液體，在吸水紙上拍干，加入1×洗滌液1mL，洗滌
1min棄去反應(yīng)槽液體，反復(fù)洗滌3次，最后在吸水紙上拍干液體；
步驟3、在反應(yīng)槽中加入1×洗滌液0.5mL和酶標(biāo)記抗體10μL，置搖床上
室溫?fù)u動(dòng)30min或置37℃溫箱30min；
步驟4、棄去反應(yīng)槽液體，在吸水紙上拍干，加入1×洗滌液1mL，洗滌
1min棄去反應(yīng)槽液體，反復(fù)洗滌3次，最后在吸水紙上拍干液體；
步驟5、在反應(yīng)槽中加入酶底物0.5mL，在搖床上搖動(dòng)5±2min，顯色；
步驟6、待質(zhì)控帶和陽性區(qū)帶顯色清晰后，倒掉槽中液體，用自來水或蒸
餾水沖洗3次以終止反應(yīng)，取出印跡膜條，置吸水紙上，待干后與標(biāo)準(zhǔn)帶對(duì)
照判斷結(jié)果。