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豬傳染性胃腸炎病毒檢測試劑盒及檢測方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-08-06
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201710675424.1 
  • 技術(專利)名稱 豬傳染性胃腸炎病毒檢測試劑盒及檢測方法 
  • 項目單位 四川納比生物科技有限公司
  • 發明人 袁旦一,何謙,溫永俊,胡林,尤其敏,李玲,孫剛 
  • 行業類別 醫藥制造-包裝材料
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 韓清繼
  • 發布時間 2021-08-06  
  • 01

    項目簡介

    本發明屬于分子生物學檢測技術領域,具體涉及一種豬傳染性胃腸炎病毒檢測試劑盒及檢測方法。針對現有技術缺乏一種操作簡單、成本低廉、反應迅速且結果準確的檢測豬傳染性胃腸炎病毒的方法的問題,本發明提供一種豬傳染性胃腸炎病毒檢測試劑盒及檢測方法。該試劑盒包括:檢測豬傳染性胃腸炎病毒的正向外圍引物F3、反向外圍引物B3、交叉引物CPR、正向探針DF5F和反向探針DF5B。本發明利用核酸恒溫擴增原理檢測豬傳染性胃腸炎病毒,檢測方法靈敏可靠,操作簡單,節約人力、時間和經濟成本,具有重要的意義。
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  • 02

    說明書

    1.豬傳染性胃腸炎病毒檢測試劑盒,其特征在于,包括以下成分:檢測豬傳染性胃腸炎病毒的正向外圍引物F3、反向外圍引物B3、交叉引物CPR、正向探針DF5F和反向探針DF5B;所述的交叉引物CPR的核苷酸序列為SEQ ID NO.3所示;所述的正向外圍引物F3的核苷酸序列為SEQ ID NO.1所示;所述的反向外圍引物B3的核苷酸序列為SEQ ID NO.2所示;所述的正向探針DF5F的核苷酸序列為SEQ ID NO.4所示;所述的反向探針DF5B的核苷酸序列為SEQID NO.5所示。2.根據權利要求1所述的豬傳染性胃腸炎病毒檢測試劑盒,其特征在于:所述的正向探針DF5F序列的5’端標記有FAM基團,所述反向探針DF5B序列的5’端標記有Biotin基團。3.根據權利要求1~2任一項所述的豬傳染性胃腸炎病毒檢測試劑盒,其特征在于:所述核酸恒溫擴增反應液組成包括:每16μL中反應液中正向外圍引物F3 0.1~0.6μmol,反向外圍引物B3 0.1~0.6μmol,交叉引物CPR 0.4~1.6μmol,正向探針DF5F 0.2~1μmol,反向探針DF5B 0.2~1μmol,MgSO4 0~6 mmol,dNTP溶液 0.1~0.6 mmol,Betaine 0~1.5mol,GspF酶8U/μL 4~12U,10×GspF Buffer 2μL,AMV 0.02~0.5 U,25×RNA Secure 0.8μL,余量為雙蒸水。4.根據權利要求3所述的豬傳染性胃腸炎病毒檢測試劑盒,其特征在于:所述核酸恒溫擴增反應液組成包括:每16μL中反應液中正向外圍引物F3 0.1~0.3μmol,反向外圍引物B30.1~0.2μmol,交叉引物CPR 0.9~1.0μmol,正向探針DF5F 0.3~0.4μmol,反向探針DF5B0.7~0.8μmol,MgSO4 1~3mmol,dNTP溶液 0.3~0.5mmol,Betaine 0.9~1.0mol,GspF酶8U/μL 9~10U,10×GspF Buffer 2μL,AMV 0.1~0.2U,25×RNA Secure 0.8μL,余量為雙蒸水。5.根據權利要求4所述的豬傳染性胃腸炎病毒檢測試劑盒,其特征在于:所述核酸恒溫擴增反應液組成包括:每16μL中反應液中正向外圍引物F3 0.26μmol,反向外圍引物B3 0.1μmol,交叉引物CPR 1.0μmol,正向探針DF5F 0.4μmol,反向探針DF5B 0.8μmol,MgSO4 2mmol,dNTP溶液 0.4 mmol,Betaine 1.0mol,GspF酶8U/μL 10U,10×GspF Buffer 2μL,AMV0.2U,25×RNA Secure 0.8μL,余量為雙蒸水。6.根據權利要求5所述的豬傳染性胃腸炎病毒檢測試劑盒,其特征在于:所述的10×GspF Buffer含有摩爾濃度為500mM Tris-HCl(pH 8.5,25℃),300 mM KCl,300 mM (NH4)SO4和1%Triton X-100。7.使用權利要求1~6任一項所述的豬傳染性胃腸炎病毒檢測試劑盒的非疾病的診斷與治療的檢測病毒的方法,其特征在于,包括以下步驟:a、用RNA提取試劑盒從待檢測的標本中提取RNA;b、將提取的RNA與豬傳染性胃腸炎病毒檢測試劑盒混合,在58~65℃下擴增反應30-90min,15min后與對照對比判讀結果。8.根據權利要求7所述的豬傳染性胃腸炎病毒檢測試劑盒檢測病毒的非疾病的診斷與治療的方法,其特征在于:步驟a中所述的待檢測的標本包括豬腸系膜淋巴結、空腸、小腸或腸內容物、糞便或肺中的一種。9.根據權利要求7或8所述的豬傳染性胃腸炎病毒檢測試劑盒檢測病毒的非疾病的診斷與治療的方法,其特征在于:步驟b為在63℃下擴增反應60分鐘。
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