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原奶或發酵乳中牛和馬源性檢測的引物和探針及試劑盒

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-27
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201810072479.8 
  • 技術(專利)名稱 原奶或發酵乳中牛和馬源性檢測的引物和探針及試劑盒 
  • 項目單位 錫林郭勒職業學院
  • 發明人 郭梁,錢俊平,孫建萍,海小,郭元晟,羅建興,劉國強,徐偉良,李春冬,朱建軍,雅梅 
  • 行業類別 中藥材獲取-動植物采集
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 周函
  • 發布時間 2022-01-27  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種原奶或發酵乳中牛和馬源性檢測的引物和探針及試劑盒,引物和探針序列如下:牛源性檢測正向引物序列如SEQ ID No.1所示;馬源性檢測正向引物序列如SEQ ID No.2所示;兩源性檢測反向引物序列如SEQ ID No.3所示;牛探針序列如SEQ ID No.4所示;馬探針序列如SEQ ID No.5所示;質控探針序列如SEQ ID No.6所示。本發明的引物、探針及試劑盒的特異性好、靈敏度高,可以實現原奶或發酵乳中牛源性、馬源性以及質控同管檢測,并且可以進行牛源性和馬源性的定量檢測。
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  • 02

    說明書

    1.原奶或發酵乳中牛源性和馬源性以及質控同管檢測的引物和探針,其特征在于,引物和探針序列如下:牛源性檢測正向引物序列如SEQ ID No.1所示;馬源性檢測正向引物序列如SEQ ID No.2所示;兩源性檢測反向引物序列如SEQ ID No.3所示;牛探針序列如SEQ ID No.4所示;馬探針序列如SEQ ID No.5所示;質控探針序列如SEQ ID No.6所示。2.根據權利要求1所述的原奶或發酵乳中牛源性和馬源性以及質控同管檢測的引物和探針,其特征在于,牛探針、馬探針和質控探針序列的5'端修飾有報告基團,3'端修飾有淬滅基團,報告基團為FAM、HEX、ROX或CY5中的任意一種,淬滅基團為TAMRA、BHQ1或BHQ2中任意一種。3.原奶或發酵乳中牛源性和馬源性以及質控同管檢測的試劑盒,其特征在于,該試劑盒中含有:SEQ ID No.1所示的牛源性檢測正向引物,SEQ ID No.2所示的馬源性檢測正向引物,SEQ ID No.3所示的兩源性檢測反向引物,SEQ ID No.4所示的牛探針,SEQ ID No.5所示的馬探針,SEQ ID No.6所示的質控探針,Probe qPCR預混液,牛陽性標準品,馬陽性標準品。4.原奶或發酵乳中牛源性以及質控同管檢測的試劑盒,其特征在于,該試劑盒中含有:SEQ ID No.1所示的牛源性檢測正向引物,SEQ ID No.3所示的兩源性檢測反向引物,SEQ ID No.4所示的牛探針,SEQ ID No.6所示的質控探針,Probe qPCR預混液,牛陽性標準品。5.原奶或發酵乳中馬源性以及質控同管檢測的試劑盒,其特征在于,該試劑盒中含有:SEQ ID No.2所示的馬源性檢測正向引物,SEQ ID No.3所示的兩源性檢測反向引物,SEQ ID No.5所示的馬探針,SEQ ID No.6所示的質控探針,Probe qPCR預混液,馬陽性標準品。6.原奶或發酵乳中牛源性和馬源性以及質控同管檢測的方法,其特征在于,步驟如下:(1)提取原奶或發酵乳的DNA;(2)檢測DNA的濃度和質量,并將濃度稀釋至100-200ng/μL;(3)利用SEQ ID No.1~SEQ ID No.6的引物和探針對稀釋DNA進行多重熒光定量PCR擴增,利用牛和馬陽性標準品做陽性對照,利用滅菌的去離子水做陰性對照,利用DNA提取的空白對照做提取方法的對照組;(4)Real-time PCR反應結束后,設置Threshold為自動,讀取牛、馬和質控相應探針的Ct值以及陽性對照、陰性對照和空白對照的Ct;只有當質控Ct≤35和陽性對照Ct≤35,陰性對照和空白對照Ct為0時才可以進行相應探針源性結果的判定;當相應探針的Ct≤35,結果判定為具有相應源性,同時有多個探針的Ct≤35,結果判定為具有相應兩源性;(5)利用牛和馬陽性標準品做DNA定量的標準曲線;(6)利用檢測乳制品的相應源性的Ct值和標準曲線中的公式可以得到乳制品中相應源性的定量檢測結果。7.根據權利要求6所述的原奶或發酵乳中牛源性和馬源性以及質控同管檢測的方法,其特征在于,Real-time PCR擴增參數為:預變性溫度94℃,30s,變性溫度94℃,5s,退火延伸溫度60℃,31s,40循環。8.根據權利要求6所述的原奶或發酵乳中牛源性和馬源性以及質控同管檢測的方法,其特征在于,Real-time PCR反應體系為:Probe qPCR預混液10μL、SEQ ID No.1所示的牛源性檢測正向引物0.5μL,濃度為10μmol/L;SEQ ID No.2所示的馬源性檢測正向引物0.5μL,濃度為10μmol/L;SEQ ID No.3所示的兩源性檢測反向引物1μL,濃度為10μmol/L;SEQ IDNo.4所示的牛探針1μL,濃度為10μmol/L;、SEQ ID No.5所示的馬探針1μL,濃度為10μmol/L和SEQ ID No.6所示的質控探針1μL,濃度為10μmol/L;DNA 1μL,滅菌的去離子水4μL,總體積20μL。
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