本發明涉及生物檢測試劑及方法，具體是針對桃內標準基因葉綠素a/b結合蛋白（Lhcb2）基因設計LAMP引物，成功篩選出了一套LAMP引物，將該套引物用于LAMP定性檢測和基于SYBR？Green？I的LAMP定量方法檢測，同時提供了相應技術的試劑盒。本發明的試劑盒由引物、反應液、Bst？DNA聚合酶、顯色劑等組成，檢測方法包括基因組的提取、環介導等溫擴增以及顯色反應，操作簡便、靈敏度高、反應快速、肉眼判定結果等優點，為桃內標檢測提供了有效、快速的檢測方法。結果表明，該引物檢測桃內標準基因的靈敏度可達到10pg。定量結果標準曲線線性關系良好。該發明將為果汁摻假檢測提供技術支持。

1.一種桃內標準基因的環介導等溫擴增檢測引物組，其特征在于，由下列引物組成：
上游外引物，peach-F3：ATTGCACCAATTTGCCAG
下游外引物，peach-B3：TGACTATGCTCTCCTGTTC
上游內引物，peach-FIP：CACATCAGCAACATTCTATTGGTTC-
ACCTCTCTCTCACTAGAACA
下游內引物，peach-BIP：ATCCACAACATCTTCACATTCCC-
GGCCTAATGAGATGCCTTG。
2.一種桃內標的檢測方法，其特征在于，以桃葉綠體a/b結合蛋白Lhcb2基因為靶基因，序
列號EF127291.1，通過環介導等溫擴增方法用權利要求1所述的檢測引物對樣品的DNA選
擇性擴增所述的靶基因片段，確認是否存在有擴增產物。
3.根據權利要求2所述的桃內標的檢測方法，其特征在于，該檢測方法具體為：
(1)模板的提?。簩悠吩谝旱心コ煞勰?，稱20mg±1mg樣品，用CTAB方法提取基因
組；
(2)環介導等溫擴增反應液包括：1.4-2.0mMdNTP、2-8mMMgSO₄、0.6-1.0M甜菜堿，
0.2-1.6μM外引物(peach-F3,peach-B3)、0.2μM內引物(peach-FIP,peach-BIP)、3.2-8.0U
BstDNA聚合酶、1xThermopolbuffer，用ddH₂O補充體系至25μL，定量反應液中將1μLddH₂O
換成1μL的20XSYBRGreenⅠ；
(3)環介導等溫反應產物的檢測：
利用電泳檢測、熒光檢測環介導反應產物是否有擴增產物。
4.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述的樣品為桃葉。
5.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，定量檢測樣品的最低限度為10pg，并且
有標準曲線方程。
6.根據權利要求3所述的桃內標環介導等溫擴增技術快速診斷試劑盒，其特征在于，普通定
性環介導等溫擴增反應程序：60-65℃反應40min，反應所使用的儀器為普通PCR儀、水浴鍋
以及恒溫培養箱。
7.根據權利要求3所述的桃內標環介導等溫擴增技術快速診斷試劑盒，其特征在于，定量環
介導等溫擴增反應程序：64℃反應3min,50個循環：64℃30s，64℃30s，反應所使用的儀
器為定量PCR儀。
8.桃內標環介導等溫擴增技術快速檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括BstDNA聚合
酶、顯色劑、一張陽性定量標準曲線、如權利要求1所述的引物組以及權利要求3所述的反
應液。
9.根據權利要求6所述的桃內標環介導等溫擴增技術快速檢測試劑盒，其特征在于，所述的
引物組由體積比為1:1:8:8的上下游外引物和上下游內引物組成。
10.根據權利要求6所述的桃內標環介導等溫擴增技術快速檢測試劑盒，其特征在于，反應
液是由體積比為5:8:1:8的1xThermopolbuffer、1.4-2.2mMdNTP、3-9mMMgSO₄、0.4-1.0M甜
菜堿組成。
11.根據權利要求6所述的桃內標環介導等溫擴增技術快速診斷試劑盒，其特征在于，BstDNA
聚合酶每微升含3-8個活性單位。
12.根據權利要求6所述的桃內標環介導等溫擴增技術快速診斷試劑盒，其特征在于，試劑
盒還包括SYBRGREENⅠ熒光染料，稀釋后可作為顯色劑，另外還有一份定量標準曲線。