本發明涉及生物技術領域，提供了一種針對產黃曲霉毒素真菌的多重PCR檢測用引物組、試劑盒及檢測方法。本發明的多重PCR檢測用引物組、試劑盒及檢測方法通過組合利用真菌通用分子標識序列(內部轉錄間隔區序列ITS)及黃曲霉毒素生化合成過程中三個關鍵基因(產黃曲霉毒素調節基因aflR、柄曲霉素轉甲氧基酶基因omt?1及雜色曲霉素A脫氫酶基因ver?1)，可實現對產黃曲霉毒素真菌檢測覆蓋范圍廣、特異性強且靈敏度高的技術效果，并且檢測耗時短、操作較簡單、檢測通量高、設備要求低，可以節省大量的人力、物力和財力，適合快速檢測的要求，易于在實際生產中推廣應用。

1.一種用于檢測產黃曲霉毒素真菌的多重PCR檢測用引物組，其特征在于，所述多重
PCR檢測用引物組由特異性針對真菌內部轉錄間隔區序列ITS的ITS引物對、特異性針對產
黃曲霉毒素調節基因aflR的aflR引物對、特異性針對柄曲霉素轉甲氧基酶基因omt-1的
omt-1引物對及特異性針對雜色曲霉素A脫氫酶基因ver-1的ver-1引物對組成，其中，
所述ITS引物對的序列為：
上游引物ITS-600-F：5’-TCCGTAGGTGAACCTGCG-3’；
下游引物ITS-600-R：5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’，
所述aflR引物對的序列為：
上游引物aflR-421-F：5’-AGCAAAGCACCCTGTCTTC-3’；
下游引物aflR-421-R：5’-TTGAGAACGATAAGGACGACC-3’，
所述omt-1引物對的序列為：
上游引物omt-1-317-F：5’-TCATTTTCGAGGAGGTTGCC-3’；
下游引物omt-1-317-R：5’-AGCTGTTTCTCGCATTTCAGC-3’，
所述ver-1引物對的序列為：
上游引物ver-1-201-F：5’-TTCGGTCACCTGAAAGACG-3’；
下游引物ver-1-201-R：5’-TGACGCAAGCGGTGTTAG-3’。
2.一種用于檢測產黃曲霉毒素真菌的多重PCR檢測用試劑盒，所述試劑盒中包含根據
權利要求1所述的多重PCR檢測用引物組。
3.根據權利要求2所述的多重PCR檢測用試劑盒，其進一步包含反應緩沖液、4種脫氧核
苷三磷酸和DNA聚合酶。
4.根據權利要求2所述的多重PCR檢測用試劑盒，其進一步包含具有如下成分的PCR反
應基礎溶液：Tris-HCl；KCl；MgCl₂；dATP、dTTP、dGTP及dCTP；以及Taq DNA聚合酶。
5.根據權利要求4所述的多重PCR檢測用試劑盒，其中，各成分以如下濃度包含于50μL
的PCR最終反應溶液中：

6.根據權利要求5所述的多重PCR檢測用試劑盒，其中，各成分以如下濃度包含于50μL
的PCR最終反應溶液中：

7.根據權利要求2-6中任一項所述的多重PCR檢測用試劑盒，其進一步包含陰性對照
DNA和陽性對照DNA。
8.根據權利要求7所述的多重PCR檢測用試劑盒，其中，所述陰性對照DNA來自黑曲霉菌
株CGMCC 3.0316，所述陽性對照DNA來自黃曲霉菌株CGMCC 3.4410。
9.使用根據權利要求1所述的多重PCR檢測用引物組或根據權利要求2-8中任一項所述
的多重PCR檢測用試劑盒對產黃曲霉毒素真菌進行檢測的方法，所述方法包括以下步驟：
a)提取待檢測樣品的總DNA作為模板DNA的步驟；
b)使用根據權利要求1所述的多重PCR檢測用引物組或根據權利要求2-8中任一項所述
的多重PCR檢測用試劑盒對所述模板DNA進行多重PCR擴增的步驟；
c)對擴增產物進行檢測的步驟；
從而對所述待檢測樣品中產黃曲霉毒素真菌的存在與否進行分析。
10.根據權利要求9所述的方法，其中，
所述多重PCR擴增的反應體系為：以總體積為50μL計，加入濃度為10pg/μL～100ng/μL
的模板DNA 1μL；
所述多重PCR擴增的反應條件為：94℃預變性2min；94℃變性20s、55℃退火30s、72℃延
伸40s，共進行35個循環；72℃延伸7min。