1.一種T-2毒素的檢測方法,其特征是,該方法包括如下步驟:
(A)T-2毒素核酸適體與單鏈信號探針DNA(ssDNA)雜交,形成雜交鏈;
(B)使該雜交鏈與待測樣品作用,當待測樣品中有T-2毒素存在時,雜交鏈選擇性地與
T-2毒素反應釋放出單鏈信號探針ssDNA;
(C)消除雜交鏈的干擾,利用DNA擴增,使雜交鏈成雙鏈DNA,然后用外切酶,將雙鏈DNA
水解成單核苷酸而除去雙鏈DNA,留下單鏈信號探針ssDNA;
(D)利用T-2毒素核酸適體-T-2毒素結合體不能誘導銀離子還原生成近紅外熒光銀納
米簇,只有單鏈信號探針ssDNA能夠誘導銀離子還原成近紅外熒光銀納米簇,檢測體系的熒
光強度,從而測定待測樣品中的T-2毒素的含量;
所述T-2毒素核酸適體為5’-CAGCTCAGAAGCTTGATCCTGTATATCAAGCATCGCGTGTTTACACATG
CGAGAGGTGAAGACTCGC-3’;所述的單鏈信號探針ssDNA為5’-CCCCCCACACCCGATCCCCCCCGCGAG
TCTTCACC-3’。
2.一種檢測T-2毒素的試劑盒,其特征是,其至少包括: T-2毒素核酸適體、可與T-2毒
素核酸適體雜交的單鏈信號探針ssDNA、DNA擴增體系、核酸外切酶、銀離子還原檢測體系。
3.根據權利要求2所述的試劑盒,其特征是,所述T-2毒素核酸適體為5’-
CAGCTCAGAAGCTTGATCCTGTATATCAAGCATCGCGTGTTTACACATGCGAGAGGTGAAGACTCGC-3’。
4.根據權利要求2所述的試劑盒,其特征是,所述的單鏈信號探針DNA為5’-
CCCCCCACACCCGATCCCCCCCGCGAGTCTTCACC-3’。
5.根據權利要求2中所述的檢測T-2毒素的試劑盒,其特征是,所述DNA擴增體系包括緩
沖溶液、dNTP和Phi29 DNA 聚合酶;所述緩沖溶液由Tris-HCl、MgCl2、 (NH4)2SO4組成。
6.根據權利要求2中所述的檢測T-2毒素的試劑盒,其特征是,所述核酸外切酶為Exo
III核酸外切酶。
7.根據權利要求2中所述的檢測T-2毒素的試劑盒,其特征是,所述的銀離子還原檢測
體系中還原劑為硼氫化物。
8.根據權利要求7中所述的檢測T-2毒素的試劑盒,其特征是,所述硼氫化物為硼氫化
鈉。
展開