本發明屬于海洋生物病原檢測技術領域，具體涉及一種同時檢測對蝦WSSV、AHPND、EHP、IHHNV的多重PCR檢測試劑盒。采用多重PCR檢測方法，能夠一次性同時利用WSSV、AHPND、EHP、IHHNV的專用檢測引物WSSV?F和WSSV?R、AHPND?F和AHPND?R、EHP?F和EHP?R、IHHNV?F和IHHNV?R進行四種病原DNA的擴增。本發明是一種方便快捷，檢測限低，且特異性強、靈敏度高、準確率高、且能同時檢測對蝦白斑綜合征病毒、對蝦急性肝胰腺壞死癥(pir)、蝦肝腸胞蟲、傳染性皮下及造血組織壞死病毒的多重PCR檢測方法。

1.一種同時檢測對蝦WSSV、AHPND、EHP、IHHNV的多重PCR檢測試劑盒，其特征在于：包括WSSV、AHPND、EHP、IHHNV的專用檢測引物WSSV-F和WSSV-R、AHPND-F和AHPND-R、EHP-F和EHP-R、IHHNV-F和IHHNV-R、陽性對照品、陰性對照品、DNA聚合酶、10×PCR緩沖液、Mg²⁺、三磷酸鳥嘌呤脫氧核苷酸、三磷酸腺嘌呤脫氧核苷酸、三磷酸胸腺嘧啶脫氧核苷酸、三磷酸胞嘧啶脫氧核苷酸和無菌超純水；WSSV、AHPND、EHP、IHHNV的專用檢測引物WSSV-F和WSSV-R、AHPND-F和AHPND-R、EHP-F和EHP-R、IHHNV-F和IHHNV-R，引物序列如下：對蝦白斑綜合征病毒WSSV上游引物：WSSV-F：TTCTCACCTCATGCTTTCTTCC SEQ ID NO:1下游引物：WSSV-R：TACTTGCTTAGAGATGGCTTCG SEQ ID NO:2對蝦急性肝胰腺壞死癥AHPND上游引物：AHPND-F：GGAAGTCGGTCGTAGTGTAG SEQ ID NO:3下游引物：AHPND-R：ATATCGCATAACCAAGCCATTC SEQ ID NO:4蝦肝腸胞蟲EHP上游引物：EHP-F：GAGAGTAGCGGAACGGATAG SEQ ID NO:5下游引物：EHP-R：GCATCACGGACCTGTTATTG SEQ ID NO:6傳染性皮下及造血組織壞死病毒IHHNV上游引物：IHHNV-F：AAGAGCAGCGACAGTTCAG SEQ ID NO:7下游引物：IHHNV-R：CGGCTTCCTTAGTTGATAGTTG SEQ ID NO:8；陽性對照品為SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12的核酸序列混合作為模板；陰性對照為：不含有對蝦白斑綜合征病毒、對蝦急性肝胰腺壞死癥(pir^VP)、蝦肝腸胞蟲、傳染性皮下及造血組織壞死病毒任一病原的任意DNA核酸序列。2.一種同時檢測對蝦WSSV、AHPND、EHP、IHHNV的多重PCR引物，其特征在于：引物序列如下：對蝦白斑綜合征病毒WSSV上游引物：WSSV-F：TTCTCACCTCATGCTTTCTTCC SEQ ID NO:1下游引物：WSSV-R：TACTTGCTTAGAGATGGCTTCG SEQ ID NO:2對蝦急性肝胰腺壞死癥AHPND上游引物：AHPND-F：GGAAGTCGGTCGTAGTGTAG SEQ ID NO:3下游引物：AHPND-R：ATATCGCATAACCAAGCCATTC SEQ ID NO:4蝦肝腸胞蟲EHP上游引物：EHP-F：GAGAGTAGCGGAACGGATAG SEQ ID NO:5下游引物：EHP-R：GCATCACGGACCTGTTATTG SEQ ID NO:6傳染性皮下及造血組織壞死病毒IHHNV上游引物：IHHNV-F：AAGAGCAGCGACAGTTCAG SEQ ID NO:7下游引物：IHHNV-R：CGGCTTCCTTAGTTGATAGTTG SEQ ID NO:8。