1.鑒定食品或飼料中9種動物源性成分的引物、探針組合物，其特征在于，包括以下引
物和探針，其核苷酸序列如下：
(1)引物
通用引物序列：
上游序列：UN-F：AAGACGAGAAGACCCATGGACTCTA，如SEQ ID NO.1所示；
下游序列：UN-R：GATTGCGCGGTTATCCCTAGGGTA，如SEQ ID NO.2所示；
馬源特異引物：
上游序列：LMF：TTTCTCCTCGCATAAGCCTATATC，如SEQ ID NO.3所示；
下游序列：LMR：GTTCCTTTTACTTCTTTTAATCTTTCCT，如SEQ ID NO.4所示；
(2)所述9種動物源性成分探針：
羊源性特異探針MYP：5’-CCACCAAGGGATAACAACACTCTGGTGG-3’，如SEQ ID NO.5所示；
牛源性特異探針NP：5’-CGGCGGTAACTAACCAACCCAAAGAGAATCCGCCG-3’，如SEQ ID NO.6
所示；
馬源性特異探針MP：5’-CAGCGAAGATAGGGATAATCCAAAAACTAATCACGCTG-3’，如SEQ
IDNO.7所示；
狐貍源性探針HP：5’-CAGACCGATGAAATCCAAACCCCTCGGTCTG-3’，如SEQ ID NO.8所示；
水貂源性探針SDP：5’-CGGCGAGGTCTAACACAACATTATTACTGGTCGCCG-3’，如SEQ ID NO.9
所示；
豬源性探針ZP：5’-CAGTGATGTTATGGTTATTTTGACTGGTTTGCATCACTG-3’，如SEQ ID NO.10
所示；
鼠源性探針SP：5'-CGCGCGTCCTCCGAATGATTTTAACCTAGACTCGCGCG-3’，如SEQ ID NO.11
所示；
雞源性探針JP：5’-CGGGTCTGGTTACTGTTGGTACTTTGAGAGACCCG-3’，如SEQ ID NO.12所
示；
鴨源性探針YP：5’-CGCGAACCTAAGACTAAACCCACCGGGTTCGCG-3’，如SEQ ID NO.13所示；
其中，所有所述探針的5’端修飾有熒光報告基團，所述各探針的熒光報告基團為FAM、
JOE、CY3、CY5和ROX中的任意一種，所述各探針的3’端修飾有淬滅基團，為TAMRA、DABCYL、
BHQ1和BHQ2中的任意一種。
2.根據權利要求1所述的鑒定食品或飼料中9種動物源性成分的引物、探針組合物，其
特征在于，所有所述探針的5’端修飾的熒光報告基團和3’端修飾的淬滅基團分別是：
羊源性特異探針MYP、牛源性特異探針NP和豬源性探針ZP的熒光報告基團均用JOE標
記；馬源性特異探針MP、鼠源性探針SP和狐貍源性特異探針HP的熒光報告基團均用FAM標
記；水貂源性探針SDP、雞源性探針JP和鴨源性探針YP的熒光報告基團均用CY3標記；所有探
針的3’端的淬滅基團均用DABCYL修飾。
3.根據權利要求1或2所述的鑒定食品或飼料中9種動物源性成分的引物、探針組合物，
其特征在于，還包括內標基因及對應的外源性內標引物IMF和IMR和外源性內標探針IMP，其
內標基因核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；
外源性內標引物：
上游序列IMF：5’-AGACCACCAAATGCCCCTATC-3’，如SEQ ID NO.15所示；
下游序列IMR：5’-GTTCCTTTTACTTCTTTTAATCTTTCCT-3’，如SEQ ID NO.16所示；
外源性內標探針IMP：5’-GCGAGGTCCCCTAGAAGAAGAACTCCCTCGC-3’，如SEQ ID NO.17所
示；
其中，外源性內標探針IMP的5’端修飾有熒光報告基團，所述熒光報告基團為FAM、JOE、
CY3、CY5或ROX，外源性內標探針IMP的3’端修飾有淬滅基團，所述淬滅基團為TAMRA、
DABCYL、BHQ1或BHQ2。
4.根據權利要求3所述的鑒定食品或飼料中9種動物源性成分的引物、探針組合物，其
特征在于，所述內標基因以重組質粒的形式存在，所述重組質粒為將內標基因片段連接到
PMD18-T載體上形成。
5.一種鑒定食品或飼料中9種動物源性成分的實時熒光PCR聯合檢測試劑盒，其特征在
于，包括權利要求1或2所述引物、探針組合物，權利要求4所述引物、探針組合物中的重組質
粒及權利要求3所述引物、探針組合物中的外源性內標引物IMF和外源性內標探針IMP，以及
PCR反應所必需的試劑。
6.根據權利要求5所述的鑒定食品或飼料中9種動物源性成分的實時熒光PCR聯合檢測
試劑盒，其特征在于，所述PCR聯合檢測試劑盒分為三個PCR反應體系，分別是A體系、B體系
和C體系，每個體系共用所述試劑盒中的通用引物，重組質粒及對應的所述外源性內標引物
對和外源性內標探針IMP以及PCR反應所必需的試劑，A體系包括上述的羊源性特異探針
MYP、狐貍源性探針HP和雞源性探針JP，B體系包括上述的牛源性特異探針NP、馬源性特異探
針MP和鴨源性探針YP以及所述馬源特異引物，C體系包括上述的水貂源性探針SDP、豬源性
探針ZP和鼠源性探針SP，其中，每個體系內的三種特異性探針所標記的熒光基團各不相同。
7.根據權利要求5或6所述的鑒定食品或飼料中9種動物源性成分的實時熒光PCR聯合
檢測試劑盒，其特征在于，所述PCR反應所必需的試劑包括：PCR緩沖液，MgCl2、dNTPs，Taq酶
和超純水；所述試劑盒中各組分構成一個20μl的反應體系：10×TaqMan Master mix 2μl，
各引物對終濃度為0.2～0.5μmol/L，各探針濃度為0.05～0.5μmol/L，重組質粒DNA濃度0.1
～1pg/μl。
8.權利要求1或2所述的鑒定食品或飼料中9種動物源性成分的引物、探針組合物在鑒
定食品或飼料中9種動物源性成分中的應用。
9.權利要求5～7中任一項所述的食品或飼料中9種動物源性成分的實時熒光PCR聯合
檢測試劑盒在鑒定食品或飼料中9種動物源性成分中的應用。
10.一種鑒定食品或飼料中9種動物源性成分的實時熒光PCR聯合檢測方法，其特征在
于，包括以下步驟：
(1)提取待檢樣品的基因組DNA，備用；
(2)利用權利要求1-4中任一項所述引物、探針組合物，或權利要求5-7中任一項所述的
PCR聯合檢測試劑盒對步驟(1)中提取的基因組DNA進行PCR擴增，收集熒光信號，進行判斷，
所述PCR擴增程序為：95℃3min預變性，95℃5s，60℃35s，在此收集熒光信號，共計45個循
環；
(3)結果判讀：收集PCR過程中的熒光信號，通過相應的熒光信號擴增曲線、Ct值鑒別待
檢樣本中是否含有所述9種動物源性成分。
展開
