本發(fā)明涉及分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種自組裝聚HRP探針、制備方法、試劑盒及其應(yīng)用。本發(fā)明自組裝聚HRP探針?lè)肿渔溨泻卸鄠€(gè)HRP，具有雙重信號(hào)放大功能，設(shè)計(jì)能夠與目標(biāo)物和自組裝聚HRP探針結(jié)合的輔助探針，采用化學(xué)發(fā)光的原理對(duì)多種物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，如蛋白質(zhì)、DNA、RNA等。同時(shí)本發(fā)明將磁分離技術(shù)、自組裝聚HRP探針的雙重信號(hào)放大功能和化學(xué)發(fā)光檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合，建立了一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便的方法并成功應(yīng)用于血清中循環(huán)miR?142?3p的檢測(cè)。對(duì)于血清中miR?142?3p檢測(cè)結(jié)果表明T?ALL患者(n＝7)與健康人(n＝7)之間響應(yīng)信號(hào)的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

1.一種自組裝聚HRP探針，其特征在于，由兩種DNA探針雜交而成，其中一種為標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶的DNA探針，記為雜交探針1，其核苷酸序列為：5'-HRP-AAAAAAAAAATACTCCCCCAGGTGCCCCTCAGACCCTTTTAGT-3'；另一種DNA探針記為雜交探針2，其核苷酸序列為：5'-GCACCTGGGGGAGTAAAAACTAAAAGGGTCTGAGGG-3'。2.一種如權(quán)利要求1所述的自組裝聚HRP探針的制備方法，其特征在于，取雜交探針1和雜交探針2，在室溫環(huán)境下渦旋雜交，即完成。3.一種試劑盒，其特征在于，包括用于捕獲目標(biāo)物的捕獲探針、輔助探針和如權(quán)利要求1所述的自組裝聚HRP探針；其中輔助探針的核苷酸序列從5'端到3'端包括與目標(biāo)物特異性結(jié)合的序列1、與自組裝聚HRP探針互補(bǔ)結(jié)合的序列2。4.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，還包括目標(biāo)物捕獲載體、化學(xué)發(fā)光板、洗滌液、雜交緩沖液、化學(xué)發(fā)光底液。5.一種如權(quán)利要求3或4所述的試劑盒的應(yīng)用，其特征在于，應(yīng)用于檢測(cè)RNA、DNA和蛋白質(zhì)。6.如權(quán)利要求5所述的試劑盒的應(yīng)用，其特征在于，應(yīng)用于檢測(cè)miR-142-3p。7.如權(quán)利要求6所述的試劑盒的應(yīng)用，其特征在于，所述捕獲探針的核苷酸序列為5'-AAAAAAAAAATCCATAAAGTAG-3'；輔助探針的核苷酸序列為5'-GAAACACTACAACTAAAAGGGTCTGAGGG-3'。8.如權(quán)利要求6或7所述的試劑盒的應(yīng)用，其特征在于，所述目標(biāo)物捕獲載體為鏈霉親和素磁珠；所述捕獲探針負(fù)載在鏈霉親和素磁珠上，記為C-DNA-MNPs。9.如權(quán)利要求6所述的試劑盒的應(yīng)用，其特征在于，用于檢測(cè)血清樣品中miR-142-3P，所述試劑盒還包括裂解液，所述裂解液中含有10～1000μg/ml蛋白酶K和質(zhì)量體積百分含量為0.1～10％的SDS，pH＝7.4。10.如權(quán)利要求8所述的試劑盒的應(yīng)用，其特征在于，其檢測(cè)方法包括以下操作步驟：(1)洗滌化學(xué)發(fā)光板：采用洗滌液清洗化學(xué)發(fā)光板；(2)加C-DNA-MNPs：用雜交緩沖液洗滌懸浮于免疫磁珠保存液的C-DNA-MNPs 3次，并重懸于相同體積雜交緩沖液中，每孔1～90μL加入化學(xué)發(fā)光板中，用洗滌液洗板；(3)加待檢測(cè)樣品：在步驟(2)處理后的化學(xué)發(fā)光板中加入一定體積的待檢測(cè)樣品，溫育，磁分離，棄上清，用洗滌液洗板；(4)在化學(xué)發(fā)光板每孔中加入輔助探針，25℃溫度下溫育20min，然后加入自組裝聚HRP探針，溫育，然后磁分離，棄上清，用洗滌液洗板3次；(5)在化學(xué)發(fā)光板每孔中加入化學(xué)發(fā)光底液，用微孔板式發(fā)光檢測(cè)儀檢測(cè)RLU；(6)按照上述步驟(1)至(5)同樣的方法檢測(cè)不同濃度的miR-142-3P標(biāo)準(zhǔn)品的RLU，繪制出RLU與miR-142-3P濃度之間關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，得出RLU與miR-142-3P濃度之間的關(guān)系式，然后將步驟(5)中檢測(cè)的待檢測(cè)樣品的RLU帶入該關(guān)系式，即可計(jì)算出待檢測(cè)樣品中miR-142-3P的濃度。