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櫻桃品種的鑒定方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-21
  • 技術成熟度:已有樣品
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201710226331.0 
  • 技術(專利)名稱 櫻桃品種的鑒定方法 
  • 項目單位 中國農業科學院鄭州果樹研究所
  • 發明人 劉聰利,李明,齊希梁,李玉紅,邱新強,丁金鴿 
  • 行業類別 健康產品質檢-標準化和計量
  • 技術成熟度 已有樣品
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 褚二臣
  • 發布時間 2021-12-21  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種櫻桃品種的鑒定方法,屬于櫻桃品種的分子鑒定領域。本發明首先公開了用于櫻桃品種鑒定的11對SSR引物,其核苷酸序列分別為SEQ ID No.1?SEQ ID No.22所示。本發明進一步從所述11對SSR引物中篩選核心引物組合,實現5個核心引物組合即能夠完全區分87份櫻桃種質,且所獲引物組合具有多態性高、擴增穩定、重復性好、電泳條帶清晰等優點。本發明還公開了一種基于S基因型信息和SSR引物組合的櫻桃品種鑒定方法以及試劑盒。利用本發明所述的引物對能夠快速、準確的完成對櫻桃不同品種的鑒定。本發明所述SSR引物對、櫻桃品種鑒定方法和試劑盒,能夠應用于櫻桃種質評價、創新、育種親本選擇等。
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  • 02

    說明書

    1.用于櫻桃品種鑒定的SSR引物對,其特征在于,由以下5對引物對組成:由核苷酸序列為SEQ ID No.7所示的正向引物和核苷酸序列為SEQ ID No.8所示的反向引物組成的引物對4;由核苷酸序列為SEQ ID No.11所示的正向引物和核苷酸序列為SEQ ID No.12所示的反向引物組成的引物對6;由核苷酸序列為SEQ ID No.13所示的正向引物和核苷酸序列為SEQ ID No.14所示的反向引物組成的引物對7;由核苷酸序列為SEQ ID No.15所示的正向引物和核苷酸序列為SEQ ID No.16所示的反向引物組成的引物對8;由核苷酸序列為SEQ ID No.21所示的正向引物和核苷酸序列為SEQ ID No.22所示的反向引物組成的引物對11。2.權利要求1所述的SSR引物對在櫻桃品種鑒定中的應用;所述櫻桃品種是:彩霞、大紫、斯科耐得斯、意大利1號、早丹、Royalton、彩虹、春暉、春嬌、春雷、春艷、大將錦、東香錦、福晨、哥倫比亞、哈松、含香、黑金、紅魯比、紅青、紅艷、蘭伯特、雷尼爾、龍寶、龍冠、美國大黃、睿德、睿賢、睿哲、睿智、薩米脫、桑蒂娜、山形美人、奇好、勝利、斯基娜、泰山朝陽、甜九月、烏梅極早、意大利3號、飴珠、友誼、宇宙、早大果、佐藤錦、Blaze star、Gilpeck、Isbella、Wyaltan、9-19、13-33、八興、賓庫、波爾娜、春繡、布魯克斯、春露、春曉、大地紅、紅瑪瑙、紅蜜、佳紅、巨紅、巨晚紅、柯迪婭、美早、莫莉、南陽紅、水晶、賽維、斯坦拉、先鋒、新星、艷陽、睿善、早紅珠、Hartland、Sandra Rose、Ulster、明珠、香泉2號、櫻姬、早星、紅燈、極佳、拉賓斯或麗珠。3.一種櫻桃品種的鑒定方法,其特征在于,包括以下步驟:(1)提取待檢測櫻桃樣品的基因組DNA;(2)以提取的DNA為模板,以權利要求1所述的SSR引物對建立PCR反應體系并進行PCR擴增;(3)將PCR擴增產物進行6%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳;(4)對電泳結果進行數據分析,即得;所述櫻桃品種是:彩霞、大紫、斯科耐得斯、意大利1號、早丹、Royalton、彩虹、春暉、春嬌、春雷、春艷、大將錦、東香錦、福晨、哥倫比亞、哈松、含香、黑金、紅魯比、紅青、紅艷、蘭伯特、雷尼爾、龍寶、龍冠、美國大黃、睿德、睿賢、睿哲、睿智、薩米脫、桑蒂娜、山形美人、奇好、勝利、斯基娜、泰山朝陽、甜九月、烏梅極早、意大利3號、飴珠、友誼、宇宙、早大果、佐藤錦、Blaze star、Gil peck、Isbella、Wyaltan、9-19、13-33、八興、賓庫、波爾娜、春繡、布魯克斯、春露、春曉、大地紅、紅瑪瑙、紅蜜、佳紅、巨紅、巨晚紅、柯迪婭、美早、莫莉、南陽紅、水晶、賽維、斯坦拉、先鋒、新星、艷陽、睿善、早紅珠、Hartland、Sandra Rose、Ulster、明珠、香泉2號、櫻姬、早星、紅燈、極佳、拉賓斯或麗珠。4.一種櫻桃品種的鑒定方法,其特征在于,包括以下步驟:(1)提取待檢測櫻桃樣品的基因組DNA;(2)以提取的DNA為模板,將權利要求1所述的SSR引物對的正向引物的5’端分別標記FAM或HEX熒光基團,然后建立PCR反應體系并進行PCR擴增;(3)將PCR擴增產物進行SSR熒光標記毛細管電泳;(4)對電泳結果進行數據分析,即得;所述櫻桃品種是:彩霞、大紫、斯科耐得斯、意大利1號、早丹、Royalton、彩虹、春暉、春嬌、春雷、春艷、大將錦、東香錦、福晨、哥倫比亞、哈松、含香、黑金、紅魯比、紅青、紅艷、蘭伯特、雷尼爾、龍寶、龍冠、美國大黃、睿德、睿賢、睿哲、睿智、薩米脫、桑蒂娜、山形美人、奇好、勝利、斯基娜、泰山朝陽、甜九月、烏梅極早、意大利3號、飴珠、友誼、宇宙、早大果、佐藤錦、Blaze star、Gilpeck、Isbella、Wyaltan、9-19、13-33、八興、賓庫、波爾娜、春繡、布魯克斯、春露、春曉、大地紅、紅瑪瑙、紅蜜、佳紅、巨紅、巨晚紅、柯迪婭、美早、莫莉、南陽紅、水晶、賽維、斯坦拉、先鋒、新星、艷陽、睿善、早紅珠、Hartland、Sandra Rose、Ulster、明珠、香泉2號、櫻姬、早星、紅燈、極佳、拉賓斯或麗珠。5.按照權利要求4所述的鑒定方法,其特征在于:權利要求1所述的引物對的正向引物的5’端分別標記FAM熒光基團。6.按照權利要求3或4所述的鑒定方法,其特征在于,所述PCR反應體系包括:反應體系的總體積為20μL,其中,模板DNA 10ng、10μmol/L正向引物0.8μL,10μmol/L反向引物0.8μL,2.5mmol/L dNTPs 1.2μL,含Mg2+的10×PCR buffer 2μL,1U Taq酶,余量為dd H2O;所述PCR擴增的程序包括:95℃預變性4min;95℃45s,54℃-57℃45s,72℃1min,35個循環;72℃10min,4℃保存;所述的SSR引物對為權利要求1所述的引物對11時,所述PCR擴增的退火溫度為55℃;所述的SSR引物對為權利要求1所述的引物對4或引物對7時,所述PCR擴增的退火溫度為57℃;所述的SSR引物對為權利要求1所述的引物對6或引物對8時,所述PCR擴增的退火溫度為56℃。7.一種用于櫻桃品種鑒定的試劑盒,包括:SSR引物對、dNTPs、含Mg2+的10×PCR buffer和Taq酶;其特征在于,所述SSR引物對是權利要求1所述的SSR引物對;所述櫻桃品種是:彩霞、大紫、斯科耐得斯、意大利1號、早丹、Royalton、彩虹、春暉、春嬌、春雷、春艷、大將錦、東香錦、福晨、哥倫比亞、哈松、含香、黑金、紅魯比、紅青、紅艷、蘭伯特、雷尼爾、龍寶、龍冠、美國大黃、睿德、睿賢、睿哲、睿智、薩米脫、桑蒂娜、山形美人、奇好、勝利、斯基娜、泰山朝陽、甜九月、烏梅極早、意大利3號、飴珠、友誼、宇宙、早大果、佐藤錦、Blaze star、Gil peck、Isbella、Wyaltan、9-19、13-33、八興、賓庫、波爾娜、春繡、布魯克斯、春露、春曉、大地紅、紅瑪瑙、紅蜜、佳紅、巨紅、巨晚紅、柯迪婭、美早、莫莉、南陽紅、水晶、賽維、斯坦拉、先鋒、新星、艷陽、睿善、早紅珠、Hartland、Sandra Rose、Ulster、明珠、香泉2號、櫻姬、早星、紅燈、極佳、拉賓斯或麗珠。
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專利技術附圖

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