特異性檢測和區(qū)分復(fù)合樣品中病原性大腸桿菌的寡核苷酸序列和方法。所述復(fù)合樣品可以是食品樣品、水樣品，或者選擇性富集的食品基質(zhì)。本發(fā)明的檢測方法可以使用有或無內(nèi)部陽性對(duì)照物的PCR擴(kuò)增方法及合適的引物對(duì)。進(jìn)行所述方法的試劑可以在試劑盒中或者以片劑形式提供。

1.一種檢測食品樣品或者水樣品中病原性大腸桿菌存在的方
法，所述方法包括：
(a)使用如下的引物對(duì)對(duì)樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增：
(ii)SEQ?ID?NO：5和6，
以產(chǎn)生PCR擴(kuò)增結(jié)果；以及
(b)檢測步驟(a)的PCR擴(kuò)增結(jié)果以檢測所述引物對(duì)的擴(kuò)增產(chǎn)物，
其中所述引物對(duì)的擴(kuò)增產(chǎn)物的陽性檢測結(jié)果提示樣品中存在病原性
大腸桿菌。
2.一種用于檢測食品樣品或者水樣品中存在病原性大腸桿菌的
方法，所述方法包括：
(a)使用兩種不同引物對(duì)對(duì)樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其中所述兩
種引物對(duì)中的一種是(ii)SEQ?ID?NO：5和6，而另一種選自如下一組：
(i)SEQ?ID?NO：2和3，
(iii)SEQ?ID?NO：8和9，以及
(iv)SEQ?ID?NO：10和11，
以產(chǎn)生PCR擴(kuò)增結(jié)果；以及
(b)檢測步驟(a)的PCR擴(kuò)增結(jié)果以檢測所述兩種不同引物對(duì)的
擴(kuò)增產(chǎn)物，其中所述兩種不同引物對(duì)的擴(kuò)增產(chǎn)物的陽性檢測結(jié)果提示
樣品中存在病原性大腸桿菌。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述兩種引物對(duì)包括(a)(ii)和(a)(iv)。
4.權(quán)利要求2的方法，其中所述兩種引物對(duì)包括(a)(ii)和(a)(iii)。
5.權(quán)利要求1的方法，其中在步驟(b)中使用解鏈曲線分析來檢
測擴(kuò)增產(chǎn)物。
6.權(quán)利要求1的方法，在所述步驟(a)之前進(jìn)一步包括制備用于
PCR擴(kuò)增的樣品的步驟。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述制備步驟包括至少一個(gè)如下步
驟：(1)細(xì)菌富集，(2)從樣品中分離細(xì)菌細(xì)胞，(3)細(xì)胞裂解，(4)總
DNA提取。
8.權(quán)利要求1的方法，其中所述樣品包括選擇性富集的食品基
質(zhì)。
9.一種用于檢測病原性大腸桿菌的分離的多核苷酸，其包括
SEQ?ID?NO：5，或SEQ?ID?NO：6。
10.一種用于檢測病原性大腸桿菌的試劑盒，其包括：
(a)(ii)SEQ?ID?NO：5和6，以及任選存在的選自如下一組的引物
對(duì)：
(i)SEQ?ID?NO：2和3，
(iii)SEQ?ID?NO：8和9，以及
(iv)SEQ?ID?NO：10和11；以及
(b)熱穩(wěn)定的DNA聚合酶。
11.權(quán)利要求10的試劑盒，其中成分(a)包括(a)(ii)和(a)(iv)。
12.權(quán)利要求10的試劑盒，其中成分(a)包括(a)(ii)和(a)(iii)。
13.一種用于進(jìn)行PCR的復(fù)制組合物，其包括：
(a)(ii)SEQ?ID?NO：5和6，以及任選存在的選自如下一組的引物
對(duì)：
(i)SEQ?ID?NO：2和3，
(iii)SEQ?ID?NO：8和9，以及
(iv)SEQ?ID?NO：10和11；以及
(b)熱穩(wěn)定DNA聚合酶。
14.權(quán)利要求13的復(fù)制組合物，其中成分(a)包括(a)(ii)和(a)(iv)。
15.權(quán)利要求13的復(fù)制組合物，其中成分(a)包括(a)(ii)和(a)(iii)。
16.一種包括權(quán)利要求13、14或者15的復(fù)制組合物的片劑。
17.一種檢測樣品中病原性大腸桿菌的試劑盒，其包括權(quán)利要求
16的片劑。