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一種快速檢測轉基因玉米BT11的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-26
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN200810054283.2 
  • 技術(專利)名稱 一種快速檢測轉基因玉米BT11的方法 
  • 項目單位 天津市農業科學院中心實驗室
  • 發明人 蘭青闊,王永,程奕,趙新,朱珠 
  • 行業類別 健康產品質檢-標準化和計量
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 衛梅
  • 發布時間 2022-01-26  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種轉基因玉米BT11的快速檢測方法。其原理是采用4條特異引物及一種具有鏈置換活性的DNA聚合酶,在63~65℃對樣品DNA模板進行擴增,短時間擴增出大量產物。其鑒定采用肉眼直接觀察反應管內沉淀的混濁度或者通過加入SYBR Green顏色變化判斷擴增與否。本發明的檢測方法具有高特異性、高效性、快速、簡便、易檢測等特點。
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  • 02

    說明書

    1.用于檢測轉基因玉米BT11的特異性引物,其特征在于由正向外引物:AGGGATTCTTGGATTTTTGG,反向外引物:AGAAATGGTTTCCACCAGAA;正向內引物:ATGAAAATAGCCATGAGCGACCATCCATTTCTTGGTCTAAAATCTGT,反向內引物GGCCATTTATCATCGACCAGAGGAATGTAATCTATGGCAAGGAA組成。2.一種采用權利要求1所述特異性引物快速檢測轉基因玉米BT11方法,其特征在于包括如下步驟:(1)采用權利要求1所述的4條特異引物及一種具有鏈置換活性的DNA聚合酶,加入模板DNA,在63-65℃進行45-60min擴增,并且在80℃持續2min終止反應,4℃保存;其中的擴增反應體系:擴增反應的總體積為25μL,其各種成分分別為:10×Buffer?2.5μL,4M甜菜堿6.25μL,0.2M?MgSO4?0.25μL,引物混合液1μL,10μM?dNTPs?3.5μL,8000U/L?Bst?DNA聚合酶大片段1-5μL,模板DNA?1-5μL,用滅菌去離子水?補齊到25μL;(2)擴增反應結束,取體系液3-25μL,采用不同方法判斷擴增與否,包括:直接向擴增管中加入嵌入劑SYBR?Green,通過顏色變化觀察有無擴增反應;或評估擴增副產物焦磷酸鎂白色沉淀物的量來觀察有無擴增反應;或通過觀察瓊脂糖凝膠電泳條帶判斷擴增結果;其中所述的引物混合液指的是將合成的引物粉末分別配成濃度為100μM的母液,然后取外引物各1μL,內引物各8μL,加滅菌去離子水2μL,充分混合,制得引物混合溶液。3.如權利要求2所述的檢測方法,其中嵌入劑SYBR?Green加入量為1-2μL。4.如權利要求2所述的檢測方法,其中所述的鏈置換活性的DNA聚合酶為8000U/L?Bst?DNA聚合酶大片段1-2μL。
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專利技術附圖

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