本發(fā)明提供用于培育轉(zhuǎn)基因玉米的培養(yǎng)基，包括共培養(yǎng)培養(yǎng)基、愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基、篩選培養(yǎng)基、分化培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，其中共培養(yǎng)培養(yǎng)基和愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中分別添加有終濃度為0.5?1.0mg/L的NAA，0.005?0.05mg/L的TDZ和/或0?0.1mg/L的KT。本發(fā)明還提供轉(zhuǎn)基因玉米的培養(yǎng)方法，以玉米幼胚為外植體，通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的方法獲得轉(zhuǎn)基因玉米植株，為玉米遺傳育種提供新的種質(zhì)資源。本方法具有周期短、陽(yáng)性率高、操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，為實(shí)現(xiàn)商業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因玉米提供了新的方法。

1.轉(zhuǎn)基因玉米的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：A、玉米果穗處理與幼胚的分離(1)玉米植株授粉6-15d后，幼胚長(zhǎng)至0.5-2.0mm時(shí)，收獲玉米幼穗，去除苞葉，準(zhǔn)備滅菌；(2)將濃度為6.15％的次氯酸鈉母液用滅菌水按體積比稀釋到15％-20％，每升溶液加入5-10μL Tween-20混勻制成滅菌液；(3)將玉米幼穗放入滅菌液中浸泡15分鐘，無(wú)菌水沖洗3-5次，備用；(4)在超凈工作臺(tái)中用無(wú)菌的手術(shù)刀片削去種子頂端，用無(wú)菌刮鏟掘取胚乳使幼胚從種子中暴露出來(lái)，剝?nèi)∮着撸瑢⒎蛛x出的幼胚放入含有1.8mL懸浮液的2mL塑料離心管中；B、侵染與共培養(yǎng)(1)吸去離心管中的懸浮液，加入200μL新鮮的懸浮液，4000rpm離心15s，45℃水浴熱擊3min，然后轉(zhuǎn)入0℃冰浴1min；(2)用移液槍吸去離心管中的懸浮液，加入1.0mlOD₆₀₀值為0.3攜帶目的基因和Bar標(biāo)記基因的農(nóng)桿菌侵染液，菌株為EHA105，侵染5-15min；(3)將離心管中的幼胚懸浮后倒入共培養(yǎng)培養(yǎng)基，并用移液槍吸去表面多余的農(nóng)桿菌侵染液，將幼胚盾片朝上放置，于23℃黑暗共培養(yǎng)2-4d；C、誘導(dǎo)與篩選(1)共培養(yǎng)后，將幼胚轉(zhuǎn)移到愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于26℃-34℃黑暗培養(yǎng)7-14d，誘導(dǎo)初級(jí)愈傷組織；(2)初級(jí)誘導(dǎo)培養(yǎng)結(jié)束后，將初級(jí)愈傷組織轉(zhuǎn)入含草丁膦的篩選培養(yǎng)基上，于28℃黑暗培養(yǎng)；定期觀察愈傷的生長(zhǎng)狀況及是否產(chǎn)生污染，若發(fā)生污染及時(shí)更換新的培養(yǎng)基；篩選2-3輪，一輪為2周；D、植株再生與移栽(1)篩選培養(yǎng)結(jié)束后，將表現(xiàn)抗性的愈傷組織轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基I中，25℃，5000lx，光照培養(yǎng)1周；(2)將出現(xiàn)綠點(diǎn)的愈傷組織轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基II中，光照培養(yǎng)2周；(3)將分化出的幼苗轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基上，25℃，5000lx，光照培養(yǎng)直至生根；(4)將轉(zhuǎn)基因再生苗轉(zhuǎn)入專(zhuān)用穴盤(pán)中生長(zhǎng)，煉苗后移栽于溫室中，3-4個(gè)月后即可收獲后代種子；上述方法中使用的培養(yǎng)基配方如下：①懸浮液：MS鹽2g/L+蔗糖68.5g/L+葡萄糖36g/L+L-脯氨酸0.115g/L，以水配制；②侵染液：MS鹽2g/L+蔗糖68.5g/L+葡萄糖36g/L+L-脯氨酸0.115g/L+乙酰丁香酮200μM+OD₆₀₀值0.3農(nóng)桿菌液，以水配制；③共培養(yǎng)培養(yǎng)基：MS鹽1.0825g/L+N6鹽1.0g/L+蔗糖20g/L+葡萄糖10g/L+脯氨酸0.115g/L+鹽酸硫胺素0.5mg/L+AgNO₃20μM+L-半胱氨酸200mg/L+2,4-D 1.5mg/L+NAA0.5mg/L+TDZ 0.005mg/L和KT 0.1mg/L+乙酰丁香酮200μM+MES 0.5g/L+1000×MS維生素1mL/L+植物凝膠8g/L；④愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS鹽2.165g/L+N6鹽2g/L+蔗糖30g/L+脯氨酸1.38g/L+MES0.5g/L+1000×MS維生素1mL/L+AgNO₃20μM+水解酪蛋白0.5g/L+2,4-D 1.5mg/L+NAA 0.5mg/L+TDZ0.005mg/L和KT 0.1mg/L+特美汀200mg/L+植物凝膠3g/L；⑤篩選培養(yǎng)基：MS鹽2.165g/L+N6鹽2g/L+蔗糖30g/L+脯氨酸1.38g/L+1000×MS維生素1mL/L+AgNO₃ 20μM+水解酪蛋白0.5g/L+2,4-D 1.5mg/L+NAA0.5mg/L+MES 0.5g/L+特美汀200mg/L+草丁膦20mg/L+植物凝膠3g/L；⑥分化培養(yǎng)基I：MS鹽4.3g/L+蔗糖20g/L+1000×LS維生素1mL/L+硫酸銅10μM+MES0.5g/L+6-BA 3.5mg/L+特美汀200mg/L+雙丙氨膦3mg/L+植物凝膠3g/L；⑦分化培養(yǎng)基II：MS鹽4.3g/L+蔗糖20g/L+1000×LS維生素1mL/L+硫酸銅10μM+MES0.5g/L+特美汀200mg/L+雙丙氨膦3mg/L+植物凝膠3g/L；⑧生根培養(yǎng)基：MS鹽4.3g/L+蔗糖20g/L+MES 0.5g/L+IBA 0.2mg/L+植物凝膠3g/L；所述玉米品種為玉米自交系A(chǔ)Y63。