本發(fā)明屬于植物愈傷組織誘導(dǎo)及培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高效誘導(dǎo)哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的方法及誘導(dǎo)培養(yǎng)基，誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分包括MS粉2.2?4.4g/L、2,4?二氯苯氧乙酸1?2mg/L、蔗糖20?30g/L、瓊脂6?8g/L，pH值為5.6?5.8，將哥倫比亞型擬南芥的子葉作為外植體接種于該誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，放在溫室中，一定條件下培養(yǎng)，可得到淡黃色、結(jié)構(gòu)松脆的顆粒狀愈傷組織，誘導(dǎo)率為100％，極大的縮減了擬南芥愈傷組織形成時(shí)間，提高了誘導(dǎo)率，為以擬南芥愈傷組織為基礎(chǔ)的高效擴(kuò)繁體系及遺傳轉(zhuǎn)化體系研究提供重要的技術(shù)平臺(tái)和支持。

1.高效誘導(dǎo)哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的培養(yǎng)基，其特征在于，用于將擬南芥子葉誘
導(dǎo)培養(yǎng)成愈傷組織，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分包括MS粉2.2-4.4g/L、2,4-二氯苯氧乙酸1-2mg/
L、蔗糖20-30g/L、瓊脂6-8g/L，pH值為5.6-5.8。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效誘導(dǎo)哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的培養(yǎng)基，其特征在于，
所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分包括MS粉4.4g/L、2,4-二氯苯氧乙酸1.0mg/L、蔗糖20-30g/L、瓊脂6-
8g/L，pH值為5.6-5.8。
3.高效誘導(dǎo)哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的方法，其特征在于，包括如下步驟：
1)按照權(quán)利要求1或2任一所述的配方配置誘導(dǎo)培養(yǎng)基；
2)外植體預(yù)處理及接種，在超凈工作臺(tái)上，用鑷子將生長良好的無菌實(shí)生擬南芥用解
剖刀切下葉片，并將切下的葉片置于步驟1)中配置的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；
3)愈傷組織的誘導(dǎo)，將步驟2)中接種好擬南芥子葉的誘導(dǎo)培養(yǎng)基置于溫室中，溫室培
養(yǎng)溫度為24-26℃、濕度為50-70％、光照強(qiáng)度為1500-2000lux、光照時(shí)間為16h，培養(yǎng)7-10天
后獲得淡黃色、顆粒狀的愈傷組織團(tuán)塊。
4.按照權(quán)利要求3所述的高效誘導(dǎo)哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的方法，其特征在于，還
包括增殖步驟，將培養(yǎng)10-15天后的愈傷組織在超凈工作臺(tái)上用鑷子剔除老化部分，挑取部
分愈傷組織接種到新的所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在一個(gè)培養(yǎng)基上接種多次并置于溫室中培養(yǎng)，
培養(yǎng)溫度為24-26℃、濕度為50-70％、光照強(qiáng)度為1500-2000lux、光照時(shí)間為16h，培養(yǎng)10-
15天后，即獲得大量淡黃色、顆粒狀的愈傷組織。
5.按照權(quán)利要求3或4任一所述的高效誘導(dǎo)哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的方法，其特征
在于，所述生長良好的無菌實(shí)生擬南芥的培養(yǎng)方法包括如下步驟：
a)擬南芥種子消毒，在無菌超凈臺(tái)上，將哥倫比亞型擬南芥種子置于離心管中，首先用
體積分?jǐn)?shù)75％的乙醇消毒30-60s后,使用滅菌水清洗一次，再使用體積分?jǐn)?shù)11％的次氯酸
鈉振蕩消毒10-15min，最后用滅菌水洗3-5次；
b)生長培養(yǎng)基的配制，以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，成分包括MS粉2.2-4.4g/L、MES 0.5-
1g/L、蔗糖20-30g/L、瓊脂6-8g/L，pH值為5.6-5.8；
c)哥倫比亞型擬南芥的培養(yǎng)，將消毒完成的種子點(diǎn)于所述生長培養(yǎng)基上，置于4℃冰箱
春化2-3d后移到溫室中，溫室培養(yǎng)溫度為24-26℃、濕度為50-70％、光照強(qiáng)度為1500-
2000lux、光照時(shí)間為16h，9-10d后獲得哥倫比亞型擬南芥無菌實(shí)生苗。
6.按照權(quán)利要求3或4任一所述的高效誘導(dǎo)哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的方法，其特征
在于，誘導(dǎo)所選的所述無菌實(shí)生擬南芥為已長出兩片完整葉子的擬南芥。
7.按照權(quán)利要求3或4任一所述的高效誘導(dǎo)哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的方法，其特征
在于，用解剖刀切下擬南芥葉片時(shí)，切割位置在距兩片葉子結(jié)合處0.1cm的葉柄上。
8.按照權(quán)利要求3或4任一所述的高效誘導(dǎo)哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的方法，其特征
在于，將擬南芥葉片接種到所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基中時(shí)，葉面朝下接種。