本發(fā)明公開(kāi)了一種山蠟梅組織培養(yǎng)與快速繁殖的方法，依次包括以下步驟：無(wú)菌苗的獲得：取成熟的山蠟梅果實(shí)，剝出帶完整種皮的種子；愈傷組織的誘導(dǎo)和不定芽的誘導(dǎo)：將子葉切下，用解剖刀分成1cm的小塊，接種于基本培養(yǎng)基中；不定芽的增殖和壯苗：將分化出的芽從愈傷組織上切下,轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)；無(wú)根苗的生根：待不定芽生長(zhǎng)3-4cm高時(shí)，切取健壯的不定芽，接種于生根培養(yǎng)基中；組培再生植株的煉苗和移栽：待生根的組培苗再生植株的苗高5cm、根數(shù)超過(guò)3根，根長(zhǎng)超過(guò)5cm時(shí)，即可進(jìn)行煉苗，3d后，搗碎培養(yǎng)基取出植株，將再生植株根部埋入培養(yǎng)土中。該方法培養(yǎng)山蠟梅生根快、玻璃化、褐化率低，成活率高。

1.一種山蠟梅組織培養(yǎng)與快速繁殖的方法，其特征在于依次包括以下步驟：
（1）無(wú)菌苗的獲得：
取成熟的山蠟梅果實(shí)，剝出其長(zhǎng)圓形的瘦果，用手術(shù)剪瘦果兩端各剪去少許，注意不要
剪破種皮或傷害種子，用手指甲小心地剝出帶完整種皮的種子，在超凈工作臺(tái)中將其浸泡
于0.2%HgCl₂溶液內(nèi)消毒17-40min，取出后無(wú)菌水浸泡沖洗3次，每次5min，接種于
Nitsch+GA₃0.1mg/L+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L的培養(yǎng)基中；此培養(yǎng)基中的蔗糖添加
量為30g/L，瓊脂添加量為7g/L，pH為5.8-6.0，培養(yǎng)基事先在121℃下高溫高壓滅菌20
min，黑暗中培養(yǎng)7d后轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為(25±1)℃，每光照培養(yǎng)14h后轉(zhuǎn)入黑暗
中培養(yǎng)10h，光照強(qiáng)度30-40μmol/(m²s)，18d后種子萌發(fā)，待兩片子葉展開(kāi)并變綠時(shí)取
子葉作為外植體；
（2）愈傷組織的誘導(dǎo)和不定芽的誘導(dǎo)
將子葉切下，用解剖刀分成1cm²左右大小的小塊，接種于Nitsch+TDZ0.5mg/L+NAA
0.2mg/L+PVP1.0mg/L+LH0.5mg/L的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)于光照培養(yǎng)室內(nèi)，培養(yǎng)溫度為(25
±1)℃，每光照培養(yǎng)14h后轉(zhuǎn)入黑暗中培養(yǎng)10h，光照強(qiáng)度30-40μmol/(m²s)；8d子葉出
現(xiàn)膨大，11d出現(xiàn)黃綠色致密愈傷組織，28d愈傷組織分化出3-5個(gè)不定芽，愈傷組織誘導(dǎo)
率100%，分化率65%，褐化率為5%；
（3）不定芽的增殖和壯苗
將分化出的芽從愈傷組織上切下,轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基Nitsch+TDZ0.3mg/L+6-BA1.0
mg/L+CH2.0mg/L+PVP1.0mg/L進(jìn)行增殖培養(yǎng)，25d增殖倍數(shù)達(dá)7.0；沒(méi)有發(fā)生玻璃化現(xiàn)
象，且芽生長(zhǎng)正常，葉色正常；
（4）無(wú)根苗的生根
待不定芽生長(zhǎng)3-4cm高時(shí)，切取健壯的不定芽，接種于生根培養(yǎng)基50%Nitsch+IAA
0.5mg/L+NAA0.1mg/L+AC0.2mg/L+CH2.0mg/L中，無(wú)根苗最早8d生根，25d生根
率為88%，根數(shù)3.8根，根長(zhǎng)4.7cm，根粗度適中；
其中50%Nitsch中的50%，指的是培養(yǎng)基中Nitsch基本培養(yǎng)基的濃度，其它物質(zhì)的濃度
不受影響；50%即1/2濃度，50%Nitsch就是指Nitsch基本培養(yǎng)基配方里的所有物質(zhì)用量為
原來(lái)的1/2，
（5）組培再生植株的煉苗和移栽
待生根的組培苗再生植株的苗高5cm、根數(shù)超過(guò)3根，根長(zhǎng)超過(guò)5cm時(shí)，進(jìn)行煉苗，煉苗
在光照培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行；首先將組培瓶的瓶蓋旋開(kāi)，讓內(nèi)外空氣交流，往瓶中添加少量清水，
12h后使瓶蓋蓋住半個(gè)瓶口，一半的空間接受日光燈的照射，再過(guò)12h后，取下組培瓶蓋，
讓日光燈完全照射再生植株，3d后，用玻璃棒將培養(yǎng)基搗碎，小心將再生植株取出，于清水
中仔細(xì)漂洗剩余的瓊脂，如少量瓊脂緊附再生植株的根毛，軟毛刷小心刷凈；洗凈瓊脂的再
生植株將根部埋入培養(yǎng)土中，為保持濕潤(rùn)，于植株上面罩上透明容器，待再生植株定植抽出
新的葉片后，取下容器。