本發(fā)明涉及一種簡便、快速的微生物分離方法，尤其是一種快速分離稻曲病菌的方法，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。該方法將稻曲球在無菌水中刮洗除去稻曲球表層的雜菌，再用75％的乙醇溶液消毒30～60s、0.1％升汞水溶液浸泡消毒2～4min，用無菌水清洗，然后加入無菌水搗碎，用搗碎液沖洗分離用脅本哲氏培養(yǎng)基，風(fēng)干培養(yǎng)基表面水份后，將培養(yǎng)皿置于恒溫箱28℃中黑暗培養(yǎng)，培養(yǎng)第6天后，用尖頭挑針挑取黃色或白色小菌落及白色菌絲移至培養(yǎng)用脅本哲氏培養(yǎng)基中純化培養(yǎng)10天，再將稻曲病菌移至PSA斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)10天后即可得到相應(yīng)的稻曲病菌。本發(fā)明在短期內(nèi)可從稻曲球中大量、快速、有效地分離出稻曲病菌，能有效解決稻曲病菌其它分離法中存在的污染、耗時(shí)、可靠性差、純化難度大等問題。

1.一種簡便的稻曲病菌快速分離方法，其特征在于：按照以下步驟進(jìn)行（1）稻曲球標(biāo)樣選擇：選取從田間采集的新鮮黃色稻曲球，或4℃冰箱中保存2個(gè)月內(nèi)的稻曲球；（2）單粒稻曲球消毒：在無菌水中刮洗除去稻曲球表層的雜菌5次，再用重量比為75%的乙醇溶液消毒30～60s、重量比為0.1%的升汞水溶液浸泡消毒2～4min和無菌水清洗3次；（3）稻曲球搗碎液制備：單粒稻曲球在無菌培養(yǎng)皿和4?mL的無菌水中，用無菌手術(shù)刀搗碎消毒好的稻曲球組織后，制備含厚垣孢子和組織碎塊的稻曲球搗碎液；（4）稻曲球搗碎液沖洗平板：用移液槍吸取1mL搗碎液沖洗分離用脅本哲氏培養(yǎng)基表面，隨后用移液槍吸去殘余的搗碎液；（5）稻曲病菌分離：無菌通風(fēng)條件下風(fēng)干培養(yǎng)基表面水份后，將培養(yǎng)皿置于恒溫箱28℃中黑暗培養(yǎng)，逐日觀察分離結(jié)果；（6）稻曲病菌純化：培養(yǎng)第6天后，用尖頭挑針挑取黃色或白色小菌落及白色菌絲移至培養(yǎng)用脅本哲氏培養(yǎng)基中純化培養(yǎng)10天；（7）稻曲病菌保存：依據(jù)病菌在培養(yǎng)基的生長特性及其顯微觀察結(jié)果，將稻曲病菌移至PSA斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)10天后，保存于4℃冰箱中；所述分離用脅本哲氏培養(yǎng)基配方為馬鈴薯300g、蛋白棟5g、蔗糖?15g、Ca(NO₃)₂·4H---₂O?0.5g、Na-₂HPO--₄·12H_-20?2.0g、瓊脂16g、加水定容至1000mL，在121℃下高壓濕熱滅菌20~25min，待培養(yǎng)基冷卻至45℃~50℃時(shí)加入抑制細(xì)菌生長的氯霉素50μg/ml混勻，倒入培養(yǎng)皿中凝固后備用；所述培養(yǎng)用的培養(yǎng)基配方如下：培養(yǎng)用脅本哲氏培養(yǎng)基配方為馬鈴薯300g、蛋白棟5g、蔗糖?15g?、Ca(NO₃)₂·4H---₂O?0.5g、Na-₂HPO--₄·12H₂0?2.0g、瓊脂16g、加水定容至1000mL，PSA固體培養(yǎng)基配方為馬鈴薯200g、瓊脂20g、蔗糖20g、加水定容至1000mL，以上培養(yǎng)基均在121℃下高壓濕熱滅菌20min后備用。