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一種加載PD-1抗體的T細胞體外培養方法、其細胞制劑及其應用

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-06-23
  • 技術成熟度:已有樣品
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201910166839.5 
  • 技術(專利)名稱 一種加載PD-1抗體的T細胞體外培養方法、其細胞制劑及其應用 
  • 項目單位 廣州筑康生物技術有限公司
  • 發明人 麥志國,謝新波 
  • 行業類別 藥品-化學藥品
  • 技術成熟度 已有樣品
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 陳思含
  • 發布時間 2021-06-23  
  • 01

    項目簡介

    本發明實施例公開了一種加載PD?1抗體的T細胞體外培養方法、其細胞制劑及其應用,涉及免疫治療技術領域,具體而言,該培養方法包括以下步驟:其包括將外周血單個核細胞與A抗培養基混合進行第一次培養;然后,將第一次培養得到的產物與B型培養基混合進行第二次培養;最后,將第二次培養后得到的產物與K型培養基混合。該培養方法能夠誘導全血分離出的淋巴細胞在培養過程中向CD8+T細胞增值分化,分離出的T細胞能夠在18天以內達到40倍以上的增幅,且CD8+T細胞的占比超過80%。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種T細胞的培養方法,其特征在于,包括:對外周血單個核細胞進行培養,并在培養后期向培養液中添加PD-1抗體繼續培養;所述培養方法包括以下步驟:其包括將外周血單個核細胞與A抗培養基混合進行第一次培養;然后,將第一次培養得到的產物與B型培養基混合進行第二次培養;最后,將第二次培養后得到的產物與K型培養基混合進行第三次培養;所述A抗培養基由以下組分組成:完全培養基、CD3單抗、白介素-2、維生素B6、干擾素-γ、白介素-1b、白介素-4、L-谷氨酰胺、丙銅酸鈉以及血漿蛋白;在A抗培養基中,CD3單抗的終濃度為80~120ng/ml;白介素-2的終濃度為800~1200u/ml,維生素B6的終濃度為5~15ng/ml,干擾素-γ的終濃度為15~25ng/ml,白介素-1b的終濃度為5~15ng/ml,白介素-4的終濃度為5~1ng/ml,L-谷氨酰胺的終濃度為180~220ng/ml,丙銅酸鈉的終濃度為15~25ng/ml,血漿蛋白的終濃度為40~60ng/ml;所述K型培養基由以下組分組成:完全培養基、PD-1抗體、白介素-2、L-谷氨酰胺、丙銅酸鈉以及血漿蛋白;在K型培養基中,PD-1抗體的終濃度為5~15ng/ml;白介素-2的終濃度為1800~2200u/ml,L-谷氨酰胺的終濃度為40~60ng/ml,丙銅酸鈉的終濃度為3~8ng/ml,血漿蛋白的終濃度為40~60ng/ml;所述B型培養基由以下組分組成:完全培養基、CD28抗體、白介素-2、維生素C、L-谷氨酰胺、丙銅酸鈉以及血漿蛋白;在B型培養基中,CD28抗體5~15ng/ml;在B型培養基中,白介素-2的終濃度為1800~2200u/ml,維生素B6的終濃度為5~15ng/ml,維生素C的終濃度為5~15ng/ml,L-谷氨酰胺的終濃度為80~120ng/ml,丙銅酸鈉的終濃度為5~15ng/ml,血漿蛋白的終濃度為15~25ng/ml;在所述第二次培養與第三次培養之間,和/或,在第三次培養之后,還包括加入C型培養基進行培養;C型培養基由以下組分組成:完全培養基、CD28抗體、白介素-2、維生素C、維生素B6、L-谷氨酰胺、丙銅酸鈉以及血漿蛋白;在C型培養基中,CD28抗體的終濃度為3~8ng/ml,白介素-2的終濃度為450~550u/ml,維生素B6的終濃度為3~8ng/ml,維生素C的終濃度為3~8ng/ml,L-谷氨酰胺的終濃度為40~60ng/ml,丙銅酸鈉的終濃度為3~8ng/ml,血漿蛋白的終濃度為5~15ng/ml。2.根據權利要求1所述的培養方法,其特征在于,待細胞增值啟動并形成細胞團并且細胞密度達到2ⅹ107~5ⅹ107個/ml進行所述第二次培養;待細胞密度達到2ⅹ107~5ⅹ107個/ml時進行第三次培養。3.根據權利要求2所述的培養方法,其特征在于,所述第一次培養的培養天數為3~6天,第二次培養的培養天數為10~12天。4.根據權利要求2所述的培養方法,其特征在于,在所述第二次培養與第三次培養之間,當細胞密度達到2ⅹ107~5ⅹ107個/ml時,加入C型培養基,在第三次培養之后,當細胞密度達到2ⅹ107~5ⅹ107個/ml時,加入C型培養基。5.一種T細胞的培養基組合,其特征在于,其包括有A抗培養基、K型培養基以及B型培養基,和/或C培養基;所述A抗培養基由以下組成組成:完全培養基、CD3單抗、白介素-2、維生素B6、干擾素-γ、白介素-1b、白介素-4、L-谷氨酰胺、丙銅酸鈉以及血漿蛋白;在A抗培養基中,CD3單抗的終濃度為80~120ng/ml;白介素-2的終濃度為800~1200u/ml,維生素B6的終濃度為5~15ng/ml,干擾素-γ的終濃度為15~25ng/ml,白介素-1b的終濃度為5~15ng/ml,白介素-4的終濃度為5~1ng/ml,L-谷氨酰胺的終濃度為180~220ng/ml,丙銅酸鈉的終濃度為15~25ng/ml,血漿蛋白的終濃度為40~60ng/ml;所述K型培養基由以下組成組成:完全培養基、PD-1抗體、白介素-2、L-谷氨酰胺、丙銅酸鈉以及血漿蛋白;在K型培養基中,PD-1抗體的終濃度為5~15ng/ml;白介素-2的終濃度為1800~2200u/ml,L-谷氨酰胺的終濃度為40~60ng/ml,丙銅酸鈉的終濃度為3~8ng/ml,血漿蛋白的終濃度為40~60ng/ml;所述B型培養基由以下組成組成:完全培養基、CD28抗體、白介素-2、維生素C、L-谷氨酰胺、丙銅酸鈉以及血漿蛋白;在B型培養基中,CD28抗體5~15ng/ml;在B型培養基中,白介素-2的終濃度為1800~2200u/ml,維生素B6的終濃度為5~15ng/ml,維生素C的終濃度為5~15ng/ml,L-谷氨酰胺的終濃度為80~120ng/ml,丙銅酸鈉的終濃度為5~15ng/ml,血漿蛋白的終濃度為15~25ng/ml;C型培養基由以下組成組成:完全培養基、CD28抗體、白介素-2、維生素C、維生素B6、L-谷氨酰胺、丙銅酸鈉以及血漿蛋白;在C型培養基中,CD28抗體的終濃度為3~8ng/ml,白介素-2的終濃度為450~550u/ml,維生素B6的終濃度為3~8ng/ml,維生素C的終濃度為3~8ng/ml,L-谷氨酰胺的終濃度為40~60ng/ml,丙銅酸鈉的終濃度為3~8ng/ml,血漿蛋白的終濃度為5~15ng/ml。
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專利技術附圖

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