本發明公開了一種NK細胞體外培養方法，屬于人類細胞的培養。本發明用PBS稀釋的赫賽汀與用PBS稀釋人免疫球蛋白，合并后均勻鋪滿培養瓶底，過夜；另取外周血行密度梯度離心，吸取單個核細胞，加入無血清培養基，調整細胞濃度為1.0×10/ml-3.0×10/ml；然后加入細胞因子IL-2、IL-15，加入到用赫賽汀包被的培養瓶中，孵箱培養。這樣在保證了各個細胞亞群擴增倍數的基礎上，促進NK細胞的生長和增殖，增強了淋巴細胞的殺傷活性，無血清培養基替代含血清的完全培養基，所得培養產物的數目和細胞活性相當，實現對NK細胞體外大規模培養，用于NK細胞的臨床生物治療，可以增加其臨床應用的安全性。

1.一種NK細胞體外培養方法，該方法是按照以下步驟進行的：a.用PBS稀釋Herceptin至濃度0.85-1.05mg/ml，取910μl；用PBS稀釋人免疫球蛋白至濃度1-2mg/ml，取400μl，合并后再用PBS補齊至20ml，均勻鋪滿培養瓶瓶底，密封置于4℃冰箱中過夜，次日取出，將液體倒出，用PBS洗2遍；b.取外周富集血4-10ml，用Ficoll法進行密度梯度離心,離心速度為350×g，離心時間為15-20分鐘，吸取中間界面層的單個核細胞，用PBS洗滌3次，加入無血清培養基，調整細胞濃度為1.0×10⁶/ml-3.0×10⁶/ml；然后加入細胞因子IL-2至終濃度10ng/ml，IL-15至終濃度50ng/ml，加入到已經用Herceptin包被的培養瓶中，37℃，5%CO₂孵箱中連續培養15天，每3天補加含20ng/ml的IL-2和100ng/ml的IL-15的無血清培養基一次，補液量與補液前液體量相同，即補液后體積為補液前的2倍。2.根據權利要求1所述NK細胞體外培養方法，其特征在于:PBS稀釋的Herceptin至濃度0.95mg/ml。3.根據權利要求1所述NK細胞體外培養方法，其特征在于:PBS稀釋5%的人免疫球蛋白至濃度1mg/ml。4.根據權利要求1所述NK細胞體外培養方法，其特征在于:吸取中間界面層的單個核細胞，用PBS洗滌3次，加入無血清培養基，調整細胞濃度為2.0×10⁶/ml。