本發明公開了一種半成熟樹突狀細胞的體外制備方法，具體為收集小鼠骨髓細胞懸液，離心，裂解，細胞重懸于RPMI 1640完全培養基中，加入10-20μg/LrmGM-CSF、2.5-10μg/L rmIL-4和1-5mg/L Jagged-1/Fc，孵育，收集疏松貼壁細胞，用完全培養基重懸細胞，加入等劑量的rmGM-CSF、rmIL-4和Jagged-1/Fc，收集疏松貼壁細胞，第6-8d加入半劑量的rmGM-CSF和rmIL-4，等劑量Jagged-1/Fc，第10-12d收獲疏松貼壁細胞，即semi-mature DCs。這種細胞只用Jagged-1/Fc處理，能導致同種異基因淋巴細胞免疫應答的能力減弱，有利于誘導免疫耐受。

1.一種半成熟樹突狀細胞的體外制備方法，其特征在于包括以下步驟：
（1）冰浴上收集小鼠骨髓細胞懸液，離心棄上清；
（2）將步驟（1）離心得到的細胞重懸于磷酸緩沖液中，加入細胞懸液體
積15-20倍的紅細胞裂解液，37.0℃避光作用8-10min，然后離心；
（3）將步驟（2）離心得到的細胞重懸于含10%胎牛血清的RPMI?1640完全
培養基中；
（4）在步驟（3）得到的細胞懸液中加入10-20μg/L重組小鼠粒細胞-巨噬細
胞集落刺激因子rmGM-CSF、2.5-10μg/L重組小鼠白細胞介素4rmIL-4和1-5
mg/L重組嵌合蛋白Jagged-1/Fc；
（5）置于培養箱中孵育；
（6）隔天1次，重復以下操作：去除上層懸浮細胞，收集疏松貼壁細胞，
離心棄上清，用含10%胎牛血清的RPMI?1640完全培養基重懸離心得到的細胞，
加入同步驟（4）等劑量的rmGM-CSF、rmIL-4和Jagged-1/Fc，然后置于培養箱
中繼續孵育；
（7）第6-8天開始，加入與步驟（4）相比半劑量的rmGM-CSF和rmIL-4，
Jagged-1/Fc劑量不變，其余同步驟（6）；
（8）第10-12天棄底層牢固貼壁細胞，收獲疏松貼壁細胞，即Jagged-1誘導
的半成熟樹突狀細胞。
2.根據權利要求1所述一種半成熟樹突狀細胞的體外制備方法，其特征在
于：所述步驟（1）、（6）中離心條件為4℃，300×g，離心3-5min。
3.根據權利要求1所述一種半成熟樹突狀細胞的體外制備方法，其特征在
于：所述步驟（2）中磷酸緩沖液的加入量為能重懸細胞的最小體積。
4.根據權利要求1所述一種半成熟樹突狀細胞的體外制備方法，其特征在
于：所述步驟（2）中離心時用冷磷酸緩沖液作為洗滌溶液，離心洗滌3次，離
心條件均為4℃，300×g，離心3-5min。
5.根據權利要求1所述一種半成熟樹突狀細胞的體外制備方法，其特征在
于：所述步驟（3）中細胞重懸后細胞密度為（2-5）×10⁹/L。
6.根據權利要求1所述一種半成熟樹突狀細胞的體外制備方法，其特征在
于：所述步驟（5）、（6）、（7）中培養箱內條件為37.0℃、5%CO₂。