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一種體外完成細胞減數分裂的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-07-23
  • 技術成熟度:已有樣品
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201510639385.0 
  • 技術(專利)名稱 一種體外完成細胞減數分裂的方法 
  • 項目單位 中國科學院動物研究所
  • 發明人 周琪,沙家豪,趙小陽,周荃,汪妹,袁艷,付銳 
  • 行業類別 健康用品-醫學護膚品
  • 技術成熟度 已有樣品
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 褚繼昊
  • 發布時間 2021-07-23  
  • 01

    項目簡介

    本發明提供了一種體外完成細胞減數分裂的方法,包括以下步驟:1)將原始生殖細胞或原始生殖細胞樣細胞(PGCLCs)與睪丸細胞以1:1的比例混合后在含有減數分裂啟動因子的細胞培養基中共培養至形成細胞集落并檢測到減數分裂啟動基因表達,得到啟動減數分裂的細胞;2)將步驟1)得到的啟動減數分裂的細胞轉移至含減數分裂維持因子的細胞培養基培養,至檢測到單倍體精子細胞特異基因表達,經分選獲得單倍體。給干細胞分化技術治療男性不育應用上臨床提供了技術基礎。
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  • 02

    說明書

    1.一種非治療目的的體外完成細胞減數分裂的方法,所述方法包括以下步驟:1)將原始生殖細胞或原始生殖細胞樣細胞(PGCLC)與睪丸細胞以1:1的數量比例混合后,在含有減數分裂啟動因子的細胞培養基中共培養至形成細胞集落并且檢測到減數分裂啟動基因表達,得到啟動減數分裂的細胞;2)將步驟1)所述的啟動減數分裂的細胞轉移至含有減數分裂維持因子的細胞培養基,以維持細胞的減數分裂,至檢測到單倍體精子細胞的特異基因表達,經分選獲得單倍體;其中,所述減數分裂啟動因子由視黃酸(RA)、骨形態發生蛋白2(BMP 2)、骨形態發生蛋白4(BMP 4)、骨形態發生蛋白7(BMP 7)和轉化生長因子β家族激活素A(Activin A)組成;所述減數分裂維持因子由睪酮、促卵泡激素(FSH)和牛垂體提取物(BPE)組成;所述原始生殖細胞、原始生殖細胞樣細胞和睪丸細胞均源自于小鼠。2.如權利要求1所述的方法,其特征在于,步驟1)所述的減數分裂啟動基因為Stra8和/或Dmc1。3.如權利要求1所述的方法,其特征在于,步驟2)中,所述分選是通過流式細胞儀實現的。4.如權利要求1所述的方法,其特征在于,所述單倍體精子細胞的特異基因選自基因Tp1、Prm1、Acrosin和Haprin中的一個或多個。5.如權利要求1所述的方法,其特征在于,所述單倍體精子細胞的特異基因為Prm1基因。6. 如權利要求1所述的方法,其特征在于,步驟1)所述含有減數分裂因子的細胞培養基中,視黃酸(RA)濃度為10-6 M、骨形態發生蛋白2(BMP 2)的濃度為20ng/ml、骨形態發生蛋白4(BMP 4)的濃度為20ng/ml、骨形態發生蛋白7(BMP 7)的濃度為20ng/ml;轉化生長因子β家族激活素A(Activin A)的濃度為100 ng/ml。7. 如權利要求1所述的方法,其特征在于,步驟2)所述含有減數分裂維持因子的細胞培養基中,睪酮的濃度為1μM、促卵泡激素(FSH)的濃度為200 ng/ml,垂體提取物的濃度為50μg/ml。8.如權利要求1所述的方法,其特征在于,步驟1)所述含有減數分裂因子的細胞培養基和步驟2)所述含有減數分裂維持因子的細胞培養基的基礎細胞培養基為含有10%血清替代物的αMEM培養基。9.如權利要求1所述的方法,其特征在于,所述睪丸細胞為Kitw/Kitwv小鼠睪丸細胞。
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專利技術附圖

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