本發明公開了一種用于腫瘤細胞免疫治療的高細胞毒活性CIK細胞，該CIK細胞通過如下步驟制備：(1)取患者外周血，收集外周血單個核細胞部分；(2)將步驟(1)收集的外周血單個核細胞部分離心，棄去上清液，獲得單個核細胞；(3)取單個核細胞按照1×10/mL細胞，加入含500～2000IU/mLγ干擾素和80～120ng/mL該化合物的完全培養基，開始誘導培養；完全培養基包括含體積百分比為10％FBS的RPMI？1640細胞培養液；(4)步驟(3)的細胞培養20～28小時后，加入50～1000ng/mL抗人CD3單克隆抗體和500～2000IU/mL重組人IL-2，繼續誘導培養，每隔2～3天傳代培養一次，誘導培養時間為13～21天，獲得CIK細胞。該CIK細胞可用于腫瘤細胞免疫治療。

1.一種用于腫瘤細胞免疫治療的高細胞毒活性CIK細胞，其特征在于通過如下步驟制備：
(1)取患者外周血，收集外周血的單個核細胞部分；(2)將步驟(1)收集的外周血的單個
核細胞部分離心，棄去上清液，獲得單個核細胞；(3)取單個核細胞按照1×10⁶/mL細胞，
加入含500～2000IU/mLγ干擾素和80～120ng/mLAphanalideK的完全培養基，開始誘導培養；
其中，完全培養基，包括含體積百分比為10％FBS的RPMI1640細胞培養液；(4)步驟(3)
的細胞培養20～28小時后，加入50～1000ng/mL抗人CD3單克隆抗體和500～2000IU/mL重組
人IL-2，繼續誘導培養，其中，每隔2～3天傳代培養一次，整個誘導培養的時間為13～21天，
獲得CIK細胞。
2.根據權利要求1所述的用于腫瘤細胞免疫治療的高細胞毒活性CIK細胞，其特征在于步
驟(1)中所述收集外周血的單個核細胞部分的方法為：(a)患者外周血中，加入1～1.5倍
體積的不含血清的細胞培養液或pH7.2PBS緩沖液稀釋，充分混勻；其中，細胞培養液包括：
RPMI1640培養液和IMDM培養液；(b)將步驟(a)獲得的血液稀釋液加入到淋巴細胞分
離液的界面上；(c)1500～2500轉/分鐘，離心15～20分鐘，收集中間層，獲得單個核細胞。
3.根據權利要求1所述的用于腫瘤細胞免疫治療的高細胞毒活性CIK細胞，其特征在于步
驟(1)中所述收集外周血的單個核細胞部分的方法為：患者經采用血細胞分離機上的淋巴細
胞采集程序，單采集患者的外周血單個核細胞。
4.根據權利要求1所述的用于腫瘤細胞免疫治療的高細胞毒活性CIK細胞，其特征在于：
步驟(2)中，離心的轉速為1000～1500轉/分鐘，離心的時間為7～10分鐘。
5.根據權利要求1所述的用于腫瘤細胞免疫治療的高細胞毒活性CIK細胞，其特征在于：
步驟(4)所述繼續誘導培養，每2～3天用含500～2000IU/mL重組人IL-2的完全培養基或含
500～2000IU/mL重組人IL-2和100～500IU/mL重組人IL-1的完全培養基傳代培養。
6.權利要求1所述的AphanalideK在制備高細胞毒活性的CIK細胞中的應用。
7.權利要求1-5任一所述的用于腫瘤細胞免疫治療的高細胞毒活性CIK細胞在制備抗腫瘤
藥物中的應用。