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一種用于高蛹蟲草生物量和高蟲草素含量的發酵方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-07-31
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN200910027839.3 
  • 技術(專利)名稱 一種用于高蛹蟲草生物量和高蟲草素含量的發酵方法 
  • 項目單位 江蘇省農業科學院
  • 發明人 劉小莉,黃開紅,周劍忠,王英,李瑩,單成俊,張麗霞,黃自蘇 
  • 行業類別 醫藥制造-中藥飲片
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 馮嘉藝
  • 發布時間 2021-07-31  
  • 01

    項目簡介

    本發明提供了一種用于高蛹蟲草生物量和高蟲草素含量的發酵方法,屬于生物工程技術領域。將蛹蟲草菌種活化后,接種到一級種子罐,再進一步擴大到發酵罐,在發酵罐中達到一定生物量后加入生物型誘導子炭角菌屬銀杏內生真菌提取液,和非生物型誘導子乙酸鈉、硫酸銨,促進菌體中蟲草素的產生。本發明采用優化的培養基有效增加蛹蟲草的菌絲生長量,并通過誘導子調控作用,蛹蟲草生物量和菌體中蟲草素含量比未添加誘導子的對照培養基分別增加了1.76倍和7.14倍,比普通的改良PDA分別增加了2.35倍、23.25倍。大大提高了蛹蟲草菌絲體的生產量和有效特征性成分的含量,有著廣闊的市場前景。
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  • 02

    說明書

    1.一種用于高蛹蟲草生物量和高蟲草素含量的發酵方法,包括:1)生物型誘導子的制備:將炭角菌屬銀杏內生真菌(Xylaria?sp)YX-28菌株接種到PDA液體培養基中,PDA液體培養基為:土豆200g、葡萄糖20g、水1000mL、pH自然,25℃、120rpm黑暗培養7d,將培養物反復凍融3次后,在冰浴條件下于超聲波細胞破碎儀中1200W、超聲時間5s、間隔時間3s共處理5min,10000rpm離心10min,收集上清冷凍干燥,制成20mg/mL的儲備溶液,最后經0.22μm濾膜過濾除菌,得生物型誘導子;2)非生物型誘導子制備:稱取乙酸鈉、硫酸銨,以體積比70%甲醇水溶液溶解,配制成濃度分別為0.07mol/L、0.056mol/L的混合溶液,經0.22μm濾膜過濾除菌,得非生物型誘導子;3)菌種活化:將PDA斜面保存的蛹蟲草(Cordyceps?militaris)菌種接種到液體培養基中活化,黑暗條件下、20℃、搖床120rpm振蕩培養5天,液體培養基為:土豆200g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀0.5g、硫酸鎂1g、維生素B10.01g、水1000ml;4)蛹蟲草發酵培養基:按糖蜜20g/L.玉米漿干粉10g/L、氯化鈣0.25g/L、磷酸二氫鉀0.5g/L、磷酸氫二鉀0.5g/L稱取各組分,以水溶解;5)10L一級種子罐培養:按照4)所述培養基配方,以7L體積計稱取所需各組分,并按體積比2‰添加消泡劑,以2-3L水溶解后加入種子罐中,121℃蒸汽滅菌15min,控制滅菌后培養基體積為罐容積的60%;培養基冷卻后,采用火圈接種法將活化好的菌液按體積比10%接種到種子罐中,種子罐溫度20℃,攪拌速率100rpm,無菌空氣流量0.75vvm,罐壓0.1Mpa,培養3天;6)100L發酵罐培養:按照4)所述培養基配方,以70L體積計稱取所需各組分,并按體積比2‰比例添加消泡劑,以40L水溶解后加入發酵罐中,121℃蒸汽滅菌15min,控制滅菌后培養基體積為罐容積的60%;培養基冷卻后,通過壓差法將種子罐中的種子液由專用管道轉移到發酵罐中,20℃,攪拌速率100rpm,無菌空氣流量0.75vvm,罐壓0.1Mpa,培養96h后由補料口加入步驟1)中所述生物型誘導子過濾除菌的銀杏內生真菌提取物,使終濃度為120μg/mL;繼續培養,120h后由補料口加入步驟2)中所述非生物型誘導子至乙酸鈉、硫酸銨的終濃度分別為0.5mmol/L、0.4mmol/L,繼續培養至8天終止發酵。2.根據權利要求1所述一種用于高蛹蟲草生物量和高蟲草素含量的發酵方法,其特征在于:所用消泡劑為大豆油。
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專利技術附圖

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