本發(fā)明公開一種重組畢赤酵母高密度發(fā)酵工藝，特別是采用全自動(dòng)控制發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵的工藝。本發(fā)明的工藝方法是將工作種子接種于BSM培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為28℃，并進(jìn)行攪拌，加氨水或磷酸控制發(fā)酵體系的pH值為4.8，罐壓為0.8個(gè)大氣壓，當(dāng)發(fā)酵罐中的甘油耗盡后一次緩慢加入甘油溶液280ml，待甘油再次徹底耗盡后，分五次緩慢加入每升含PTM12ml的甲醇溶液進(jìn)行甲醇誘導(dǎo)，誘導(dǎo)72小時(shí)后結(jié)束發(fā)酵。

1.豬帶絳蟲六鉤蚴TSOL18重組巴斯德畢赤酵母的高密度發(fā)酵方法，其特征是從劃線的YPD平板上挑取一個(gè)豬帶絳蟲六鉤蚴TSOL18重組畢赤酵母單克隆菌落到一級(jí)種子YPD培養(yǎng)基中培養(yǎng)菌體濃度OD₆₀₀達(dá)到6.0，得到一級(jí)種子培養(yǎng)液；再將上述培養(yǎng)液倒入含體積比為50％的BSM發(fā)酵罐培養(yǎng)基的YPD二級(jí)種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)至菌體濃度OD₆₀₀達(dá)到40.0，得到發(fā)酵工作種子液，再按10％的接種量接種于BSM培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為28℃，并進(jìn)行攪拌，加氨水或磷酸控制發(fā)酵體系的pH值為4.8，罐壓為0.8個(gè)大氣壓，校正溶氧DO達(dá)100％，當(dāng)發(fā)酵罐BSM培養(yǎng)基中的甘油耗盡后，以0.67ml/min的流速緩慢加入每升含12mlPTM₁的50％甘油溶液7小時(shí)，待補(bǔ)加的甘油再次徹底耗盡后，分五次緩慢加入每升含PTM₁12ml的甲醇溶液進(jìn)行甲醇誘導(dǎo)，首次加入甲醇溶液30ml，第二次加入甲醇溶液60ml，當(dāng)甲醇耗盡后，再次以0.25ml/min的流速加入甲醇溶液360ml，誘導(dǎo)表達(dá)24小時(shí)后，第四次以0.5ml/min的流速加入甲醇溶液360ml，誘導(dǎo)12小時(shí)后，最后一次以0.6ml/min的流速加入甲醇溶液1296ml，36小時(shí)后結(jié)束發(fā)酵。