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高效番茄基因轉化方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-08-01
  • 技術成熟度:詳情咨詢
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN200510013577.7 
  • 技術(專利)名稱 高效番茄基因轉化方法 
  • 項目單位 天津農學院
  • 發明人 楊靜慧,劉艷軍,羅云波,張偉玉,楊恩芹 
  • 行業類別 其他領域
  • 技術成熟度 詳情咨詢
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 韓水
  • 發布時間 2021-08-01  
  • 01

    項目簡介

    本發明屬于農業生物技術領域或植物基因工程領域的一種高效番茄基因轉化方法。主要技術特點是該方法采用農桿菌轉基因工程技術,采用克隆和反義構建乙烯受體蛋白基因并轉化番茄,通過馬鈴薯傷流液預處理、生長素預處理、轉化芽的篩選、伸長培養基等步驟,使番茄的抗衰老基因-反義乙烯基因的轉化率大大提高,以此得到抗衰老、耐儲藏的番茄;而且,整個轉化工藝比較簡單,成本較低,花費時間較少。
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  • 02

    說明書

    1.一種高效番茄基因轉化方法,其特征在于:該轉化方法的步驟為:(1).將番茄種子消毒后播種在MS培養基上進行培養,至兩片子葉長大;(2).取攜帶番茄反義乙烯基因的農桿菌單菌落接種到YEB液體培養基上,在搖床上培養,待其OD值為0.6時待用;(3).馬鈴薯傷流液與農桿菌對番茄子葉外植體進行侵染,在抗性培養基上誘導再生芽;(4).采用1-5mg/L的IAA或1-5mg/L的IBA,分別與農桿菌對番茄子葉外植體進行侵染,在抗性培養基上誘導再生芽;(5).在含有選擇標記的分化培養基上篩選轉化芽;(6).將該轉化芽在伸長培養基內進行長大培養;(7).植入生根培養基進行生根培養;(8).生根移栽;入土栽培。2.根據權利要求1所述的高效番茄基因轉化方法,其特征在于:番茄種子接種到MS培養基上培養的時間為1-3周,培養的環境條件是:溫度為25-28℃,光照每天12小時,光強2500-5000LUX。3.根據權利要求1所述的高效番茄基因轉化方法,其特征在于:在搖床培養攜帶番茄反義乙烯基因的農桿菌的方法是:取攜帶番茄反義乙烯基因的農桿菌單菌落接種到YEB液體培養基上,在25-28℃溫度條件下,在搖床上以200轉/分搖擺48小時,該液體培養基內添加50mg/L的卡那霉素和100mg/L的慶大霉素,待其OD值為0.6時待用。4.根據權利要求1所述的高效番茄基因轉化方法,其特征在于:所述的馬鈴薯傷流液與農桿菌對番茄子葉外植體進行侵染的方法是:取馬鈴薯傷流液經抽濾滅菌后稀釋1-3倍,與培養過夜的農桿菌一起侵染番茄子葉外植體,浸泡10分鐘,然后放在抗性培養基上誘導再生芽。5.根據權利要求1所述的高效番茄基因轉化方法,其特征在于:所述的采用IAA或IBA分別與農桿菌對番茄子葉外植體進行侵染的方法是:用1-5mg/L的IAA或1-5mg/L的IBA,分別與農桿菌一起侵染番茄子葉外植體,浸泡10分鐘,然后放在抗性培養基上誘導再生芽。6.根據權利要求1所述的高效番茄基因轉化方法,其特征在于:將經過侵染處理后的外植體從菌液中取出,用無菌濾紙吸干,將子葉接種到分化培養基上進行共培養,48小時后轉入生芽培養基;該分化培養基為由2-6mg/L的BA和0.1-0.4mg/L的IAA構成的MS培養基;在該分化培養基上放一層濾紙,把該子葉放置在濾紙上,25-28℃溫度下的密閉和暗條件下培養48小時取出,然后去掉濾紙,在分化培養基上再添加卡那霉素50-100mg/l和500mg/L的羧變青霉素;在此過程中,子葉的傷口要充分接觸培養基,在25-28℃溫度條件下,光強2500-5000LUX的條件下,晝夜光照,培養2-4周后,產生再生轉化芽。7.根據權利要求1所述的高效番茄基因轉化方法,其特征在于:所述的該轉化芽在伸長培養基內進行長大培養的方法是:將該轉化芽切下,在伸長培養基內進行長大培養,在25-28℃溫度條件下,光強2500-5000LUX的條件下,每天光照培養12小時;該伸長培養基由MS培養基、0.5-2mg/L?BA、0.1-0.4mg/L的IAA、卡那霉素50-100mg/L和500mg/L的羧變青霉素構成。8.根據權利要求1所述的高效番茄基因轉化方法,其特征在于:所述的植入生根培養基進行生根培養的方法為:待再生轉化芽生長到2-3cm長度時切下,在25-28℃溫度條件下,光強2500-5000LUX的條件下,植入生根培養基進行培養,每天光照培養12小時;該生根培養基為MS培養基、0.2-0.4mg/L的IAA、50-100mg/l卡那霉素和500mg/L的羧變青霉素構成。9.根據權利要求1所述的高效番茄基因轉化方法,其特征在于:所述的生根移栽為:取出再生芽,沖洗掉培養基,將其栽到蛭石培養基內,澆MS營養液,保持每天3-4小時太陽光直射,在25-28℃溫度條件下培養;當生長出3-4個葉片時,然后入土栽培。
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專利技術附圖

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