本發明公開了一種增強乳酸菌膽汁耐受能力的方法，采用重組DNA技術將唾液乳酸桿菌Lactobacillus salivarius LMG14476的膽鹽水解酶基因克隆連接到乳酸乳球菌表達載體pNZ8148，并轉化至Lactococcus lactis NZ9000，經篩選鑒定得到具有膽鹽水解酶活性的重組乳酸乳球菌。該菌株膽汁耐受能力比野生菌提高了近5倍。采用本發明方法構建出的具有膽鹽水解酶活性的乳酸乳球菌可作為具有降低血清膽固醇功能的益生菌制劑的模式菌株，應用于醫藥、食品領域。

1.一種增強乳酸菌膽汁耐受能力的方法，其特征在于，將膽鹽水解酶基因在乳酸乳球
菌中進行表達；
所述膽鹽水解酶基因為bsh1或bsh2，bsh1基因序列如SEQ ID NO.1所示；bsh2基因序列
如SEQ ID NO.2所示；
所述乳酸乳球菌為Lactococcus lactis NZ9000。
2.權利要求1所述的方法，其特征在于所述膽鹽水解酶基因優選bsh1。
3.權利要求1所述的方法，其特征在于克隆bsh1及bsh2所用的引物序列為：
bsh1-F:5’-ATTATAAGGAGGCACTCACCATGTGTACAGCAATTACTTTAAATGGTA-3’
bsh1-R:5’-GAAAGCTTGAGCTCTCTAGATTAATTCAACTTATTTATTATTTGTTTTCTT-3’
bsh2-F:5’-ATTATAAGGAGGCACTCACCATGTGTACAGCAATTACTTTAAATGG-3’
bsh2-R:5’-GAAAGCTTGAGCTCTCTAGATTAATTCAACTTATTTATTATTTGTTTTCTTT-3’。