本發明公開了一種線粒體靶向的亞硝酰氫分子熒光探針及其制備方法和應用，屬于分析化學技術領域。該探針分子的結構式如式(Ⅰ)所示：該探針分子系首次合成的針對細胞線粒體中的HNO分子進行檢測的熒光探針，其合成方法相對比較容易，產率較高，且后處理過程相對簡單。本發明實現了HNO分子探針的選擇性快速檢測，并且選擇性好，抗其他分子干擾能力強。本發明是一種簡單，快速，靈敏的HNO分子特異性檢測試劑，在生物分子檢測領域具有廣闊的應用前景。

1.一種線粒體靶向的亞硝酰氫分子熒光探針，其特征在于，所述熒光探針的結構式如
式(Ⅰ)所示：

所述的亞硝酰氫分子熒光探針的制備方法包括以下步驟：
1)將2′,4′-二羥基-2-苯酮苯甲酸與間羥基苯基哌嗪在三氟乙酸中，氮氣保護，90℃加
熱回流，反應24h，反應結束后減壓旋干溶劑得粗產品，然后用硅膠柱分離得到化合物MHN-
1，結構式如下：

2)將步驟1)所得化合物MHN-1溶于乙腈中，加碳酸氫鈉后再加入Fmoc-Cl，氮氣保護，室
溫反應3h，反應完全后萃取、干燥、旋干并用硅膠柱分離得到化合物MHN-2，所述MHN-2和
Fmoc-Cl的結構式分別如下：

3)將化合物二苯基磷苯甲酸溶于二氯甲烷中，加入二環己基碳二亞胺和4-二甲氨基吡
啶后在室溫下攪拌20min后加入化合物MHN-2，在室溫下攪拌8h，反應完全后萃取、干燥、旋
干并用硅膠柱分離得到化合物MHN-3，結構式如下：

4)將化合物MHN-3溶于乙腈，然后逐滴加入15％的哌啶，在室溫下攪拌30min，反應完全
后，加入水淬滅反應，然后用二氯甲烷分兩次萃取，依次用水、飽和食鹽水洗滌后干燥、旋干
溶劑，并用硅膠柱進行分離得到化合物MHN-4，結構式如下：

5)將化合物MHN-4溶于DMF中，加入K₂CO₃后在室溫下攪拌10min，加入三苯基膦丁基溴后
在室溫下反應過夜，用TLC板檢測反應，反應完全后分離提純得到目標探針化合物Mito-HN。
2.根據權利要求1所述的亞硝酰氫分子熒光探針，其特征在于，所述步驟1)中硅膠柱分
離洗脫劑配比為甲醇：二氯甲烷＝1:5。
3.根據權利要求1所述的亞硝酰氫分子熒光探針，其特征在于，所述步驟2)中萃取劑為
乙酸乙酯，干燥劑為無水硫酸鈉，硅膠柱洗脫劑配比為甲醇/二氯甲烷＝1:30。
4.根據權利要求1所述的亞硝酰氫分子熒光探針，其特征在于，所述步驟3)中萃取劑為
乙酸乙酯，干燥劑為無水硫酸鈉，硅膠柱洗脫劑配比為甲醇：二氯甲烷＝1:50。
5.根據權利要求1所述的亞硝酰氫分子熒光探針，其特征在于，所述步驟4)中干燥劑為
無水硫酸鈉，硅膠柱洗脫劑配比為甲醇/二氯甲烷＝1:30。
6.根據權利要求1所述的亞硝酰氫分子熒光探針，其特征在于，所述步驟5)中分離提純
的具體方法為：將反應產物用乙酸乙酯稀釋，水洗2次，飽和食鹽水洗滌2次，無水硫酸鈉干
燥，減壓旋干溶劑得粗產品，并用硅膠柱進行分離，洗脫劑配比為甲醇：二氯甲烷＝1:20。
7.一種權利要求1所述的亞硝酰氫分子熒光探針的應用，其特征在于，所述探針可應用
于水環境和生物細胞體系中HNO的傳感檢測；所述的傳感檢測包含熒光檢測，目視定性檢
測，細胞成像檢測。