本發(fā)明公開了一種TaqMan探針實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測黃病毒的非診斷性方法，該非診斷性方法包括一對(duì)引物和探針對(duì)待檢樣本進(jìn)行實(shí)時(shí)定量檢測，旨在針對(duì)黃病毒屬成員多、檢測繁瑣，給新發(fā)蟲媒病毒監(jiān)測檢測帶來不便的問題。該非診斷性方法克服了傳統(tǒng)和現(xiàn)代方法中存在的不足,該引物和探針具有高度特異性、重復(fù)性好、靈敏度高、可進(jìn)行多重定量的特點(diǎn)。

1.一種TaqMan探針實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測黃病毒的非診斷性方法，其特征在于，該非診斷性方法包括:設(shè)計(jì)了一對(duì)引物和探針對(duì)待檢樣本進(jìn)行實(shí)時(shí)定量檢測，引物和探針序列為：正向引物序列Fla-F??????5’-CAACATGATGGGRAARAG-3’；反向引物序列Fla-R??????5’-CHAGRGCTTCRAACTCHAG-3’；熒光探針序列Fla-P???????5’-FAM-CTCCVAGCCACATGTACCATAT-BHQ1-3’。2.?如權(quán)利要求1所述的非診斷性方法，其特征在于，所述該非診斷性方法包括步驟：1）樣本用裂解液和RNA抽提液處理，提取病毒RNA；2）實(shí)時(shí)熒光RT-PCR反應(yīng)，配制一定組分濃度的25μLPCR反應(yīng)體系，混勻后短暫離心分裝到PCR管中;3）將待測樣品加入到反應(yīng)體系中，進(jìn)行擴(kuò)增；4）收集熒光信號(hào)，檢測Ct值。3．如權(quán)利要求2所述的非診斷性方法，其特征在于，所述實(shí)時(shí)熒光RT-PCR反應(yīng)的體系組分及其體積如下：????????組分???????????????????????????????體積μL2×RT-PCR?Buffer??????????????12.510μM??Fla-F????????????????????????0.510μM??Fla-R????????????????????????0.510μM??Fla-P?????????????????????????0.525×RT-PCR?Enzyme?Mix???????1病毒RNA??????????????????????????????5雙蒸水??????????????????????????????????5總體積?????????????????????????????????25擴(kuò)增條件：采用本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增條件。