本發(fā)明提供一種集信號(hào)放大和信號(hào)報(bào)告為一體的寡核苷酸探針。探針是一對(duì)基于靶分子設(shè)計(jì)的具有粘性末端的DNA發(fā)夾序列，實(shí)質(zhì)是雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)燃料分子和G-四鏈體序列相結(jié)合的產(chǎn)物，既具有雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可通過(guò)無(wú)酶、等溫的方式將靶分子信號(hào)級(jí)聯(lián)放大的特點(diǎn)，又可通過(guò)G-四鏈體序列這一信號(hào)報(bào)告元件的引入使得放大后的靶分子信號(hào)以方便、簡(jiǎn)捷的方式得以檢測(cè)。本發(fā)明還提供了由上述探針介導(dǎo)的無(wú)酶等溫核酸探針?lè)椒ǎ墒勾龣z測(cè)物的信號(hào)在沒(méi)有任何酶參與且于常溫條件下便可得到放大和檢測(cè)，方法靈敏準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便易行。

1.一種集信號(hào)放大和信號(hào)報(bào)告為一體的寡核苷酸探針，其特征在于，所
述探針為一對(duì)基于靶分子設(shè)計(jì)的具有粘性末端的DNA發(fā)夾序列，其由
一條普通的單鏈寡核苷酸序列通過(guò)內(nèi)部堿基互補(bǔ)結(jié)合形成的，均由粘
性末端、莖部和環(huán)部組成；第一個(gè)發(fā)夾序列的粘性末端位于5’-端，
第二個(gè)發(fā)夾序列的粘性末端位于3’-端；
其中，第一個(gè)發(fā)夾序列的莖部序列由兩部分組成，即①靠近粘性末
端一側(cè)的部分莖部序列，該序列與粘性末端共同構(gòu)成靶分子的特異識(shí)別
序列；和②靠近環(huán)部的部分莖部序列，其為G-四鏈體5’-端部分序列；
第一個(gè)發(fā)夾序列的環(huán)部序列與被封閉的G-四鏈體序列3’-端一側(cè)相
接，其主要由G-四鏈體序列的剩余部分組成；
第二個(gè)發(fā)夾序列的粘性末端位于整個(gè)發(fā)夾序列的3’-端，與相鄰的莖
部序列共同組成第一個(gè)發(fā)夾序列環(huán)部3’-端一側(cè)莖部序列的互補(bǔ)序列；
第二個(gè)發(fā)夾序列的環(huán)部為第一個(gè)發(fā)夾序列5’-粘性末端的互補(bǔ)序列，
與相鄰的5’-端一側(cè)的莖部序列共同組成第一個(gè)發(fā)夾序列中靶分子特異
識(shí)別序列的互補(bǔ)序列。
2.如權(quán)利要求1所述的寡核苷酸探針，其特征在于，所述的G-四鏈體5’-
端部分序列為被封閉在莖部的一小段G-四鏈體序列，使G-四鏈體序
列在無(wú)靶分子存在時(shí)不顯示活性。
3.如權(quán)利要求1或2所述的寡核苷酸探針，其特征在于，第一個(gè)發(fā)夾序
列的靶分子特異識(shí)別序列與被封閉的信號(hào)報(bào)告元件序列結(jié)合處附近
含有至少一個(gè)堿基與莖部另一側(cè)序列的相應(yīng)堿基不配對(duì)。
4.如權(quán)利要求1或2所述的寡核苷酸探針，其特征在于，所引入的G-
四鏈體序列為：5’-TGG?GTA?GGG?CGG?GTT?GGG?AAA-3’。
5.一種用無(wú)酶、等溫核酸探針技術(shù)對(duì)靶分子進(jìn)行檢測(cè)的方法，其特征在
于，在反應(yīng)體系中加入如權(quán)利要求1所述的寡核苷酸探針，在pH為
中性或近中性、Na⁺濃度至少大于200mM和常溫條件下，靶分子打開(kāi)
探針，引發(fā)雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，一段時(shí)間后形成類(lèi)似雙鏈DNA的長(zhǎng)鏈聚合
分子，達(dá)到將靶分子信號(hào)級(jí)聯(lián)放大的目的，結(jié)果可通過(guò)瓊脂糖凝膠電
泳進(jìn)行檢測(cè)；與此同時(shí)，探針中的G-四鏈體序列得到釋放，使得放大
后的靶分子信號(hào)可通過(guò)多種信號(hào)呈現(xiàn)形式得到檢測(cè)。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，檢測(cè)結(jié)果可通過(guò)肉眼觀察、
可見(jiàn)光吸收或熒光吸收測(cè)定這些信號(hào)檢測(cè)方式來(lái)反映。