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一種基于順磁納米Fe-Co合金探針間接富集的NMR食源性致病菌快速檢測方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-02-03
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201310098318.3 
  • 技術(專利)名稱 一種基于順磁納米Fe-Co合金探針間接富集的NMR食源性致病菌快速檢測方法 
  • 項目單位 南昌大學
  • 發明人 張錦勝,唐群,賴衛華 
  • 行業類別
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 李春枚
  • 發布時間 2022-02-03  
  • 01

    項目簡介

    一種基于順磁納米Fe-Co合金探針間接富集的NMR食源性致病菌快速檢測方法,屬于食品安全致病菌快速檢測技術領域。本發明依賴于建立的可以用于食品液體樣本中致病菌的核磁共振檢測方法,利用第1抗體捕獲目標菌,利用第1抗體的抗體即2抗包被制備的順磁納米Fe-Co合金探針對目標菌進行富集、分離,利用納米Fe-Co合金的順磁特性對核磁共振衰減信號的弛豫時間的影響,檢測出樣本中是否含有目標致病菌。不同的具體的對應關系為:順磁納米Fe-Co合金探針,在一定條件下顯示出線性關系,即納米Fe-Co合金含量大,樣品的T2/T1值越小,在一定范圍能夠定量檢測目標菌。該方法可以用于食品樣本中有害致病菌的快速檢測,從而可以作為大批待檢樣品的快速篩選。
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  • 02

    說明書

    1.一種基于順磁納米Fe-Co合金探針間接富集的NMR食源性致病菌快速檢測方法,其特征步驟如下:1)在樣品中加入檢測目標菌的特異性一抗,若樣品中存在目標菌,則通過抗體抗原的結合形成一抗復合物;2)檢測目標菌的一抗的抗體,即二抗包被順磁納米Fe-Co合金探針的制備;3)將目標菌特異性一抗在固定板上固定備用;4)富集目標菌株,并分離:在第1步處理過的樣品中,加入第2步制得的順磁納米Fe-Co合金探針,充分混合震蕩反應一段時間,抓取目標菌后施加外加磁場,由于納米Fe-Co合金具有順磁特性,Fe-Co合金探針會聚集到磁場一邊,吸走上清液則可以分離出探針;若待檢樣本中有目標菌,則首先會在第1步時與一抗形成一抗復合物,一抗復合物會再與探針表面的二抗復合,通過外加磁場而被富集、分離;洗滌、磁分離后加少量無菌的去離子水則形成目標菌的順磁納米Fe-Co合金探針懸濁液;此時,捕到和未捕到一抗復合物的Fe-Co合金探針還是混在一起;5)將富集的Fe-Co合金探針懸濁液加到第3步固定了單克隆抗體的固定板上,若存在目標菌則形成雙抗夾心,用無菌的去離子水清洗,則沒有抓取到目標菌的探針就被洗掉,若不存在目標菌,則所有探針都被洗掉;6)之后,用洗脫劑將固定板上的雙抗夾心的探針洗下來,用外加磁場分離探針的方法用無菌的去離子水清洗掉離子和溶劑,如果還存在探針就是抓到目標菌的探針;7)這部分探針,加入無菌的去離子水形成探針的懸濁液,進行核磁共振的弛豫時間測定;在固定場強下,無菌的去離子水的T1或T2是一個恒定值,以無菌的去離子水為空白,測得的懸濁液的弛豫時間T1或T2相比無菌的去離子水有顯著降低,則說明含有探針,從而間接證明樣本中有目標致病菌,探針的量與T1或T2的下降呈正比,通過加標定量探針而間接定量出目標菌的量。2.根據權利要求1所述的基于順磁納米Fe-Co合金探針間接富集的NMR食源性致病菌快速檢測方法,其特征是所述探針為具有順磁特性的納米Fe-Co合金材料。3.根據權利要求1所述的基于順磁納米Fe-Co合金探針間接富集的NMR食源性致病菌快速檢測方法,其特征是所述的目標菌的最終檢出評價方法基于核磁共振技術的弛豫時間參數的變化。4.根據權利要求1所述的基于順磁納米Fe-Co合金探針間接富集的NMR食源性致病菌快速檢測方法,其特征是所述弛豫時間,是指自旋-晶格弛豫時間(T1)和自旋-自旋弛豫時間(T2)。5.根據權利要求1所述的基于順磁納米Fe-Co合金探針間接富集的NMR食源性致病菌快速檢測方法,其特征是,T1采用180?-τ-90?脈沖方法測定,T2采用CPMG序列方法測定。6.根據權利要求1所述的基于順磁納米Fe-Co合金探針間接富集的NMR食源性致病菌快速檢測方法,其特征是所述的一抗為檢測目標菌的特異性單克隆抗體,二抗為一抗的抗體。
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