本發(fā)明公開了一種人白細(xì)胞介素7在真核宿主中表達(dá)的方法，真核宿主為畢赤酵母X-33，主要包括以下步驟：(1)克隆人IL-7基因；(2)構(gòu)建真核表達(dá)載體；(3)轉(zhuǎn)化重組載體到真核酵母宿主中；(4)酵母宿主中表達(dá)rIL-7蛋白。本發(fā)明改變傳統(tǒng)的用原核宿主大腸桿菌表達(dá)IL-7，探索出用真核宿主畢赤酵母來表達(dá)IL-7的方法，既保證了IL-7生物學(xué)活性，又獲得大量穩(wěn)定的蛋白。

1.人白細(xì)胞介素7在真核宿主中表達(dá)的方法，其特征在于：真核宿主為畢赤酵母X-33，主要包括以下步驟：(1)克隆人IL-7基因：以人骨髓基質(zhì)細(xì)胞提取總mRNA為模板，先用RT-PCR擴增出總cDNA，再以該cDNA為模板，用IL-7特異引物擴增出完整rhIL-7基因片段，所用IL-7特異引物中引入XhoI酶切位點和在末端XbaI酶切位點；回收PCR產(chǎn)物連接到質(zhì)粒pMD20-T載體，得質(zhì)粒rhIL-7/pMD20-T，經(jīng)過測序確認(rèn)為正確表達(dá)序列；(2)構(gòu)建真核表達(dá)載體：將表達(dá)載體pPICZαB和質(zhì)粒rhIL-7/pMD20-T經(jīng)過XhoI和XbaI雙酶后純化回收，并用T4DNA連接酶于15-17℃連接15-17小時，得重組載體pPICZαB-IL7；(3)轉(zhuǎn)化重組載體到真核酵母宿主中：重組載體pPICZαB-IL7用SacI單酶切線性化后，用氯化鋰轉(zhuǎn)化方法轉(zhuǎn)化入畢赤酵母X-33宿主菌株中；經(jīng)過抗性篩選得到陽性克隆；(4)酵母宿主中表達(dá)rIL-7蛋白：挑取含有陽性克隆的畢赤酵母X-33宿主菌株，用BMGY培養(yǎng)基培養(yǎng)至光密度值＞2.0，離心收集細(xì)胞沉淀，用1L?BMMY培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并加入0.5％甲醇誘導(dǎo)，溫度在26-28℃繼續(xù)培養(yǎng)4天，每24小時補充甲醇使其中濃度保持0.5％，大量發(fā)酵表達(dá)IL-7蛋白，表達(dá)出的蛋白分泌在培養(yǎng)基中。2.根據(jù)權(quán)利1所述的方法，其特征在于：所述IL-7特異引物為5’GGCTCGAGATGTTCCATGTTTCTTTT?3’3’AGTCTAGATCAGTGTTCTTTAGTGCC?5’。