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一種工程菌及其在丹參素和丙酮酸聯產中的應用

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-26
  • 技術成熟度:詳情咨詢
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201810352697.7 
  • 技術(專利)名稱 一種工程菌及其在丹參素和丙酮酸聯產中的應用 
  • 項目單位 江南大學
  • 發明人 蔡宇杰,熊天真,蔣靜,丁彥蕊,白亞軍,鄭曉暉 
  • 行業類別 藥品-中藥
  • 技術成熟度 詳情咨詢
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 朱連華
  • 發布時間 2022-01-26  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種工程菌及其在丹參素和丙酮酸聯產中的應用,屬于生物工程技術領域。本發明構建了一種新型的三酶共表達基因工程菌,該菌可應用于光學純的3?(3,4?二羥基苯基)?2?羥基丙酸的生產。本發明選擇的(D/L)?α?羥基羧酸脫氫酶均具有底物專一性差,光學專一性強的特點,可生產光學純的D?丹參素和L?丹參素,同時聯產丙酮酸。進一步地,同時敲除或強化表達大腸桿菌基因組上的相關基因促進底物的轉運及減少產物的分解。本發明的生產過程簡單且原料易得,雜質少,具有重要的工業應用價值。
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  • 02

    說明書

    1.一種重組大腸桿菌,其特征在于,所述重組大腸桿菌同時表達了外源L-乳酸脫氫酶、α-羥基羧酸脫氫酶和L-氨基酸氧化酶,并在宿主大腸桿菌的基礎上敲除了酚類化合物分解相關的基因;所述L-乳酸脫氫酶是NCBI上登錄號為WP_003131075.1的L-乳酸脫氫酶;所述α-羥基羧酸脫氫酶是NCBI上登錄號為WP_003643296.1、WP_002335374.1、或EEI22188.1的D-α-羥基羧酸脫氫酶,或NCBI上登錄號為WP_013858488.1、WP_003607654.1或WP_035430779.1的L-α-羥基羧酸脫氫酶;所述L-氨基酸氧化酶是NCBI上登錄號為WP_004244224.1、OAT30925.1、EFE55026.1、WP_036414800.1或WP_026879504.1的L-氨基酸氧化酶;所述酚類分解基因為原兒茶酸2,3-雙加氧酶基因hpaD、2,3-二羥苯基丙酸鹽1,2雙加氧酶基因mhpB中的任意一種或者兩種組合。2.根據權利要求1所述的重組大腸桿菌,其特征在于,所述重組大腸桿菌還強化表達了乳酸轉運基因、NAD合成基因、FAD合成基因中的一種或者多種。3.根據權利要求2所述的重組大腸桿菌,其特征在于,所述強化表達的基因為乳酸轉運基因lldP、NAD合成基因nadA、FAD合成基因ribF中的任意一種或多種。4.根據權利要求2或3所述的重組大腸桿菌,其特征在于,所述強化表達是通過將宿主大腸桿菌基因組上所要強化表達的基因前增加組成型啟動子。5.根據權利要求1所述的重組大腸桿菌,其特征在于,所述L-乳酸脫氫酶、α-羥基羧酸脫氫酶、L-氨基酸氧化酶是通過pCOLADuet共表達的。6.根據權利要求1所述的重組大腸桿菌,其特征在于,所述宿主菌為大腸桿菌BL21(DE3)。7.一種生產丹參素的方法,其特征在于,所述方法是利用權利要求1-3,5-7任一所述的重組菌。8.一種生產丹參素的方法,其特征在于,所述方法是利用權利要求4所述的重組菌。9.根據權利要求7所述的方法,其特征在于,所述生產丹參素,是進行全細胞轉化生產。10.根據權利要求8所述的方法,其特征在于,所述生產丹參素,是進行全細胞轉化生產。11.根據權利要求9或10所述的方法,其特征在于,所述全細胞轉化生產的體系中,包括細胞濕重為1-200g/L,左旋多巴濃度為1-200g/L,L-乳酸濃度為1-200g/L,pH 4.0-9.0;于15-40℃反應,時間1-48小時。
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專利技術附圖

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