本發明屬于遺傳工程和結核病疫苗研究技術領域，具體為一種促凋亡重組卡介苗及其制備方法。其通過在大腸桿菌—分枝桿菌穿梭質粒pMV261中依次插入結核保護性抗原Ag85B的信號肽ASP和促細胞凋亡基因BAX先得到重組質粒<b>，</b>再將重組質粒電轉入BCG而獲得。與BCG相比，本發明所構建的重組卡介苗rBCG::？ASP—BAX具有較強的誘導巨噬細胞發生凋亡的能力，有望提高機體對結核分枝桿菌的免疫力。另一方面，本發明重組卡介苗誘導機體產生的細胞免疫以Th1為主導，更利于形成抗結核分枝桿菌的免疫保護力。因此，本發明的重組卡介苗rBCG::ASP—BAX有望成為新的有效抗結核疫苗,具有較大的研發潛力。

1.一種促凋亡重組卡介苗，其特征在于，其通過在大腸桿菌—分枝桿菌穿梭質粒
pMV261中依次插入結核保護性抗原Ag85B的信號肽ASP和促細胞凋亡基因BAX得到重組質粒
pMV261—ASP—BAX，再將重組質粒pMV261—ASP—BAX電轉入BCG而獲得，記為rBCG::ASP—
BAX。
2.一種如權利要求1所述的促凋亡重組卡介苗的制備方法，其特征在于，具體步驟如
下：
（1）分別PCR擴增Ag85B的信號肽ASP和Bax基因；
（2）用同樣的核酸內切酶對Ag85B的信號肽ASP和質粒pMV261進行雙酶切，再用T4DNA
連接酶進行連接形成重組質粒pMV261—ASP；
（3）將步驟（2）獲得的重組質粒進行測序，測序正確后，轉化，克隆；
（4）抽提步驟（3）獲得的重組質粒，用同樣的核酸內切酶對Bax和重組質粒pMV261—ASP
雙酶切，再用T4DNA連接酶進行連接形成重組質粒pMV261—ASP—BAX；
（5）將步驟（4）獲得的重組質粒pMV261—ASP—BAX通過電脈沖轉移系統轉入BCG中，形
成重組卡介苗rBCG::ASP—BAX。
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：步驟（2）中所述核酸內切酶是EcoRI和
HindIII。
4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：步驟（4）中所述核酸內切酶是Hind
III和SalI。