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一種霉酚酸均相酶免疫檢測試劑及其制備和檢測方法

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2022-01-25
  • 技術(shù)成熟度:已有樣品
交易價(jià)格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實(shí)
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN201510039618.3 
  • 技術(shù)(專利)名稱 一種霉酚酸均相酶免疫檢測試劑及其制備和檢測方法 
  • 項(xiàng)目單位 蘇州博源醫(yī)療科技有限公司
  • 發(fā)明人 虞留明,伍勇,鄧擁軍,封颯颯,成志鵬 
  • 行業(yè)類別 醫(yī)療器械-醫(yī)療實(shí)驗(yàn)室
  • 技術(shù)成熟度 已有樣品
  • 交易價(jià)格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 趙中天
  • 發(fā)布時(shí)間 2022-01-25  
  • 01

    項(xiàng)目簡介

    本發(fā)明涉及一種霉酚酸檢測試劑及其制備和檢測方法,具體涉及一種霉酚酸均相酶免疫檢測試劑及其制備和檢測方法,包括:抗霉酚酸特異性抗體、用于檢測抗霉酚酸特異性抗體?霉酚酸復(fù)合物的指示試劑;上述抗霉酚酸特異性抗體由霉酚酸免疫原免疫動(dòng)物得到。本發(fā)明的有益之處在于:本發(fā)明的霉酚酸免疫原特異性強(qiáng)、免疫原性高,制備出的抗霉酚酸特異性抗體特異性強(qiáng)、效價(jià)高,并且與常見的62種藥物無任何交叉反應(yīng);含有上述抗霉酚酸特異性抗體的均相酶免疫檢測試劑可以方便、快速、準(zhǔn)確地確定樣品中的霉酚酸含量,并且可以在全自動(dòng)生化分析儀上同時(shí)測定多個(gè)樣品,實(shí)現(xiàn)霉酚酸的高通量快速化測定,準(zhǔn)確度高,特異性強(qiáng),精確度和檢測效率有了較大的提高。
    展開
  • 02

    說明書

    1.霉酚酸衍生物的合成方法,其特征在于,霉酚酸衍生物,結(jié)構(gòu)式如式(Ⅱ)所示:

    合成路線為:

    2.一種霉酚酸均相酶免疫檢測試劑的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:
    (1)權(quán)利要求1所述的霉酚酸衍生物的合成與純化,并進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定;霉酚酸衍生物的
    合成路線為:

    (2)霉酚酸免疫原的合成:使霉酚酸的末端羧基與具有免疫原性的蛋白質(zhì)載體連接;
    (3)用霉酚酸免疫原免疫動(dòng)物,制備并純化抗霉酚酸特異性抗體;
    (4)葡萄糖-6-磷酸脫氫酶-半抗原偶聯(lián)物的制備:制備葡萄糖-6-磷酸脫氫酶溶液,激
    活霉酚酸衍生物,使葡萄糖-6-磷酸脫氫酶與霉酚酸衍生物連接,純化連接產(chǎn)物;
    (5)霉酚酸均相酶免疫檢測試劑的制備:
    試劑A的制備:由抗霉酚酸特異性抗體和均相酶底物混合而成;
    試劑B的制備:由葡萄糖-6-磷酸脫氫酶-半抗原偶聯(lián)物與Tris緩沖液混合而成。
    3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種霉酚酸均相酶免疫檢測試劑的制備方法,其特征在于,所
    述的步驟(2)中,蛋白質(zhì)載體為BSA,具體合成步驟如下:
    a.稱取2.72g磷酸二氫鉀、4.26g磷酸氫二鈉、8.5g氯化鈉、0.95g氯化鎂,共同溶解于1L
    去離子水中,調(diào)節(jié)pH至7.4,制成緩沖溶液A;
    b.稱取3mg BSA,室溫下溶解于3mL上述緩沖溶液A中,制成BSA溶液;
    c.稱取3mg霉酚酸,溶解于300ul上述緩沖溶液A中,制成霉酚酸溶液;
    d.當(dāng)上述霉酚酸溶液剛變澄清時(shí),將其逐滴加入上述BSA溶液中,然后將此混合溶液在
    2-8℃下攪拌1小時(shí);
    e.將反應(yīng)后的上述混合溶液用上述緩沖溶液A進(jìn)行透析,透析后所得溶液即為霉酚酸
    免疫原溶液,在霉酚酸免疫原溶液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%的NaN3,于-20℃下儲存。
    4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種霉酚酸均相酶免疫檢測試劑的制備方法,其特征在于,所
    述的步驟(4)具體過程為:
    a.稱取1.09g磷酸二氫鉀、1.70g磷酸氫二鈉、8.5g氯化鈉、0.95g氯化鎂,共同溶解于1L
    去離子水中,調(diào)節(jié)pH至7.4,制成緩沖溶液B;
    b.稱取3mg葡萄糖-6-磷酸脫氫酶,室溫下溶解于3mL上述緩沖溶液B中,制成葡萄糖-6-
    磷酸脫氫酶溶液;
    c.稱取3mg霉酚酸衍生物,溶解于300ul上述緩沖溶液B中,制成霉酚酸衍生物溶液;
    d.當(dāng)上述霉酚酸衍生物溶液剛變澄清時(shí),將其逐滴加入上述葡萄糖-6-磷酸脫氫酶溶
    液中,然后將此混合溶液在2-8℃下攪拌1小時(shí);
    e.將反應(yīng)后的上述混合溶液用上述緩沖溶液B進(jìn)行透析,透析后所得溶液即為葡萄糖-
    6-磷酸脫氫酶-半抗原偶聯(lián)物溶液,在葡萄糖-6-磷酸脫氫酶-半抗原偶聯(lián)物溶液中加入質(zhì)
    量分?jǐn)?shù)0.5%的BSA和質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%的NaN3,于2-8℃下儲存。
    5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種霉酚酸均相酶免疫檢測試劑的制備方法,其特征在于,步
    驟(5)的具體過程如下:
    試劑A的制備:將4.036g的氧化態(tài)的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、1.711g的葡萄糖-6-磷酸
    用1L 55mM、pH=8.0的Tris緩沖液溶解制成均相酶底物;將制備的抗霉酚酸特異性抗體加
    到上述均相酶底物中,抗體與均相酶底物的體積比為1:100~1:10000;
    試劑B的制備:將制備的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶-半抗原偶聯(lián)物加到120mM、pH=8.2的
    Tris緩沖液中,上述偶聯(lián)物與Tris緩沖液的體積比為1:100~1:10000。
    6.霉酚酸均相酶免疫檢測試劑的檢測方法,其特征在于,包括以下步驟:
    (1)將待測樣本與抗霉酚酸特異性抗體接觸;
    (2)根據(jù)待測樣本中霉酚酸與抗霉酚酸特異性抗體的結(jié)合情況,利用指示試劑判斷樣
    本中霉酚酸的含量;
    所述待測樣本為血清、血漿、唾液或尿液;
    所述的指示試劑選自酶試劑,包括:酶標(biāo)偶聯(lián)物和酶的底物;上述酶標(biāo)偶聯(lián)物包括葡萄
    糖-6-磷酸脫氫酶-半抗原酶標(biāo)偶聯(lián)物;上述酶的底物為葡萄糖-6-磷酸;所述葡萄糖-6-磷
    酸脫氫酶-半抗原酶標(biāo)偶聯(lián)物由葡萄糖-6-磷酸脫氫酶與霉酚酸衍生物反應(yīng)形成;所述霉酚
    酸衍生物的合成路線為:

    展開

專利技術(shù)附圖

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