本發明公開了一種HPLC法同時測定牛黃寧宮片中大黃酚、大黃素、甘草苷、連翹苷、黃芩苷和鹽酸小檗堿六種活性成分含量的方法，該方法采用的色譜條件如下：色譜柱：TC?C(4.6mm×250mm，5μm)；檢測波長：280nm；流動相：甲醇?0.05％磷酸；梯度洗脫：0?35min 10％?80％甲醇,35?50min 80％?80％甲醇,50?60min 80％?10％甲醇；流速：1.0mL·min；柱溫：25℃；進樣量：10μL。在此色譜條件下，色譜峰分離良好，大黃酚、大黃素、甘草苷、連翹苷、黃芩苷和鹽酸小檗堿的濃度與峰面積呈現良好的線性關系。本方法簡單、快速、準確、重現性好，可為全面評價和控制牛黃寧宮片提供質量依據。

1.一種牛黃寧宮片中六種活性成分含量的測定方法，其特征在于：該方法利用高效液
相色譜法(HPLC)在同一實驗條件下同時分離并測定牛黃寧宮片中大黃酚、大黃素、甘草苷、
連翹苷、黃芩苷和鹽酸小檗堿的含量，具體步驟如下：
(1)對照品溶液的制備：精密稱取大黃酚、大黃素、甘草苷、連翹苷、黃芩苷和鹽酸小檗
堿對照品，分別置于5mL容量瓶中，加入3mL甲醇溶解，定容至刻度，制得濃度分別為0.20μ
g·mL^-1大黃酚、0.44μg·mL^-1大黃素、0.32μg·mL^-1甘草苷、0.20μg·mL^-1連翹苷、0.56μg·
mL^-1黃芩苷和0.88μg·mL^-1鹽酸小檗堿的單個對照品溶液，再分別精密吸取六種單個對照
品儲備液0.5mL，置于同一5mL容量瓶中，加入甲醇定容，即得混合對照品溶液；
(2)供試品溶液的制備：取牛黃寧宮片樣品，除去糖衣后顯出棕褐色，研細，精密稱取
0.03814g，置于5mL容量瓶中，加入3mL的甲醇，超聲溶解45min，加入甲醇至容量瓶刻線處，
搖勻，靜置24小時，過濾，即得供試品溶液；
(3)分離檢測：將混合對照品溶液和供試品溶液分別注入安捷倫1100液相色譜儀，采用
如下色譜條件檢測：色譜柱：TC-C₁₈ 4.6mm×250mm，5μm；流動相A為甲醇，B為0.05％磷酸進
行梯度洗脫，流速1.0mL·min^-1；檢測器：VWD檢測器；檢測波長：280nm；柱溫：25℃；進樣量：
10μL；
所述流動相為如下的梯度洗脫條件：