本發(fā)明涉及產(chǎn)生胰島素類(lèi)型的方法，所述方法通過(guò)遺傳改造胰島素類(lèi)型的前體并且將所述前體在與賴(lài)氨酸酰胺或精氨酸酰胺的酶催化的連接反應(yīng)或者用經(jīng)保護(hù)基修飾的賴(lài)氨酸或精氨酸的酶催化的連接反應(yīng)中轉(zhuǎn)化為各自的胰島素，以及任選地隨后水解。

1.制備Gly(A21)，Arg(B31)，Arg(B32)人胰島素的方法，其中，
被酰胺化或用Boc保護(hù)基C-末端保護(hù)的精氨酸，在具有胰蛋白酶的生
物學(xué)活性的酶存在時(shí)被添加
到Gly(A21)，Arg(B31)人胰島素的B鏈的C-末端氨基酸上，
并且將得到的Gly(A21)，Arg(B31)，Arg(B32)人胰島素純化。
2.權(quán)利要求1的方法，還包括消除所添加的精氨酸的酰胺基團(tuán)或C-末
端Boc保護(hù)基。
3.權(quán)利要求1或2中所述的方法，其中Gly(A21)，Arg(B31)，Arg(B32)
人胰島素的B鏈的C末端被酰胺化。
4.權(quán)利要求1所述的方法，其中Gly(A21)，Arg(B31)人胰島素通過(guò)重組
表達(dá)前體蛋白質(zhì)來(lái)制備，所述前體蛋白質(zhì)包含Gly(A21)，Arg(B31)人胰島素
的A鏈和B鏈。
5.權(quán)利要求4所述的方法，其中作為復(fù)制子一部分的基因被表達(dá)。
6.權(quán)利要求4或5中任一項(xiàng)所述的方法，其中使用細(xì)菌或酵母作為宿主
細(xì)胞。
7.權(quán)利要求4所述的方法，其中前體蛋白質(zhì)在表達(dá)后被分泌。
8.權(quán)利要求7所述的方法，其中前體蛋白質(zhì)分離自細(xì)菌或酵母的細(xì)胞上
清液。
9.如權(quán)利要求6所述的方法，其中前體蛋白質(zhì)分離自細(xì)菌周質(zhì)。
10.權(quán)利要求4所述的方法，其中對(duì)獲得的前體蛋白質(zhì)實(shí)施折疊過(guò)程和
酶促切割。
11.權(quán)利要求1或2中所述的方法，其中Gly(A21)，Arg(B31)人胰島素通
過(guò)重組定向表達(dá)制備。
12.權(quán)利要求1或2中所述的方法，其中具有胰蛋白酶生物學(xué)活性的酶
選自人胰蛋白酶、豬胰蛋白酶、牛胰蛋白酶。
13.權(quán)利要求1或2中所述的方法，其中酶具有賴(lài)氨酰內(nèi)肽酶活性。
14.權(quán)利要求1或2中所述的方法，其中Gly(A21)，Arg(B31)，Arg(B32)
人胰島素的B鏈的C末端隨后在水解反應(yīng)中被脫保護(hù)。