本發明公開了一種促肝細胞生長素活性檢測方法。該檢測方法，采用RPMI-1640培養液，檢測包括準備試劑步驟、供試品溶液制備步驟、測定供試品組3孔吸收度平均值、對照組3孔吸收度平均值和空白對照組3孔吸收度平均值步驟、計算刺激指數步驟，其特點是：所述的RPMI-1640培養液采用不含谷氨酰胺的RPMI-1640培養液。本發明克服了現有技術存在的測試不穩定，重復測定一致性差等缺陷，具有測定方法穩定，測定結果可靠，檢測數據重復率較高、一致性較好等優點，測定結果能正確反映供試品的活性。

1.一種促肝細胞生長素活性檢測方法，使用RPMI-1640培養液，檢測包括準備試劑步驟、供試品溶液制備步驟、測定供試品組3孔吸收度平均值、對照組3孔吸收度平均值和空白對照組3孔吸收度平均值步驟、計算刺激指數步驟，其特征在于：所述的RPMI-1640培養液采用不含谷氨酰胺的RPMI-1640培養液，所述的促肝細胞生長素活性檢測方法分以下步驟：A、試劑配制：a、配制pH7.3的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液，取氯化鈉8.0g、氯化鉀0.2g、磷酸氫二鈉Na₂HPO₄?1.15g及磷酸二氫鉀0.2g，加超純水1000ml溶解后，高壓滅菌備用；b、配制10％小牛血清培養液，取不含谷氨酰胺的RPMI-1640培養液900ml，加已滅活的新生小牛血清100ml；c、配制0.25％胰蛋白酶-乙二胺四醋酸二鈉消化液，取0.25g胰蛋白酶及0.02g乙二胺四醋酸二鈉，加0.01mol/L磷酸鹽緩沖液100ml溶解后，用5.6％碳酸氫鈉調節pH值至7.2，過濾除菌，-20℃保存備用；d、配制MTT噻唑藍溶液，取MTT50mg，加0.01mol/L磷酸鹽緩沖液10ml溶解后，過濾除菌，保存于冷處，使用不超過兩周；B、供試品溶液制備：用不含谷胺酰胺的RPMI-1640培養液將供試品制成每1ml中含多肽100μg的溶液；C、測定供試品組3孔吸收度平均值、對照組3孔吸收度平均值和空白對照組3孔吸收度平均值：a、用10％小牛血清培養液培養SMMC-7721細胞至對數增長期，用0.25％胰蛋白酶-乙二胺四醋酸二鈉消化液消化，加10％小牛血清培養液稀釋至每1ml中含2.5×10⁴～5×10⁴個細胞，將上述細胞懸液在96孔細胞培養板上鋪板，每孔100μl，其中留3孔加10％小牛血清培養液100μl作為空白對照，置37℃、5％二氧化碳飽和水汽培養箱中培養3～4小時使鋪在細胞培養板孔上的對照品和空白對照品貼壁；b、在細胞培養板每孔上加供試品溶液100μl，每批供試品均做3孔；c、細胞對照組和空白對照組每孔分別加不含谷胺酰胺的RPMI-1640培養液100μl，置37℃、5％二氧化碳飽和水汽培養箱中培養48小時，結束培養前4小時取出細胞培養板，吸去培養液，每孔加入pH7.3的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液洗一次，然后再在每孔中加入上述磷酸鹽緩沖液100ul和MTT溶液20μl，繼續培養；d、培養結束后，吸出培養液，每孔加入100μl二甲基亞砜搖勻，在酶標儀上以550nm的波長處分別測定供試品組3孔吸收度平均值對照組3孔吸收度平均值和空白對照組3孔吸收度平均值D、按照下面公式計算表示促肝細胞生長素活性的刺激指數：2.根據權利要求1所述的促肝細胞生長素活性檢測方法，其特征在于：所述的不含谷氨酰胺的RPMI-1640培養液采用不含谷胺酰胺成分的RPMI-1640培養基配制，所述的不含谷氨酰胺的RPMI-1640培養液配制方法為，取碳酸氫鈉2.00g及不含谷胺酰胺成分的RPMI-1640培養基10.0g加超純水800ml溶解后，用1mol/L鹽酸溶液調節pH值至6.9，加超純水稀釋至1000ml，過濾除菌備用。