本發(fā)明公開了一種生產(chǎn)長春花生物堿的方法。該方法，包括下述步驟：1)將長春花的外殖體進(jìn)行脫分化培養(yǎng)得到長春花愈傷組織并經(jīng)過繼代培養(yǎng)獲得疏松快速生長的細(xì)胞系；2)將步驟1)所獲得的長春花愈傷組織細(xì)胞系在添加秋水仙堿的基本培養(yǎng)基中誘導(dǎo)培養(yǎng)得到多倍體細(xì)胞系，然后進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)獲得大量長春花多倍體細(xì)胞；3)將步驟2)得到的長春花多倍體細(xì)胞接種于合成培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到富含長春花次生代謝產(chǎn)物的細(xì)胞。本發(fā)明的方法用長春花細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)長春質(zhì)堿，可穩(wěn)定的實(shí)現(xiàn)長春質(zhì)堿的工業(yè)化生產(chǎn)，并且其生產(chǎn)成本較低，培養(yǎng)周期短，不受自然環(huán)境以及氣候的影響，可以實(shí)現(xiàn)周年生產(chǎn)。

1.一種生產(chǎn)長春質(zhì)堿的方法，包括下述步驟：1)將長春花的外植體進(jìn)行脫分化培養(yǎng)得到長春花愈傷組織并經(jīng)過繼代培養(yǎng)獲得疏松快速生長的細(xì)胞系；所述長春花的外植體為長春花的幼莖、節(jié)間或葉片；所述脫分化培養(yǎng)用培養(yǎng)基為在MS基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加1.0-5.0mg/L吲哚乙酸，1.0-5.0mg/L細(xì)胞分裂素6-BA，20-40g/L蔗糖的培養(yǎng)基；所述脫分化培養(yǎng)為在18-25℃，光照強(qiáng)度為1000-3000Lux，每日10-16小時(shí)照光條件下進(jìn)行培養(yǎng)3-4周；所述繼代培養(yǎng)用培養(yǎng)基為在MS基本培養(yǎng)基中添加20-60g/L蔗糖，1.0-5mg/L植物細(xì)胞生長素NAA和1.0-5mg/L植物細(xì)胞分裂素6-BA的培養(yǎng)基；所述繼代培養(yǎng)的條件為20-25℃，避光條件下培養(yǎng)；2)將步驟1)所獲得的長春花愈傷組織細(xì)胞系在添加濃度為10-40mg/L的秋水仙堿的MS基本培養(yǎng)基中誘導(dǎo)培養(yǎng)得到多倍體細(xì)胞系，然后進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)獲得大量長春花多倍體細(xì)胞；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)是在20-30℃，避光，80-120rpm/分轉(zhuǎn)速的搖床上振蕩培養(yǎng)3-7天；所述擴(kuò)增培養(yǎng)用培養(yǎng)基為在MS基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加了1.0-5mg/L的NAA，1.0-5mg/L的6-BA，質(zhì)量百分含量為2-6％的蔗糖而得到的培養(yǎng)基；所述擴(kuò)增培養(yǎng)是在20-25℃，避光條件下培養(yǎng)3-4周；3)將步驟2)得到的長春花多倍體細(xì)胞接種于合成培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到富含長春花生物堿的細(xì)胞；所述合成培養(yǎng)基為在MS基本培養(yǎng)基中添加1.0-5mg/L萘乙酸、30-60g/L蔗糖、10-50mg/L色氨酸、50-200mg/L谷氨酰胺、1-3mg/L輔酶A、2.1-8.4mg/L萘普生、0.15-0.30mg/L阿司匹林、1-5mg/L布諾芬得到的培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)是在25-30℃，黑暗條件下，80-120rpm的搖床或大型生物反應(yīng)器中培養(yǎng)3-7天。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟1)中，所述繼代培養(yǎng)為繼代3代以上。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步驟2)中，還包括在擴(kuò)增培養(yǎng)前將所述多倍體細(xì)胞進(jìn)行繼代馴化培養(yǎng)3代以上。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述方法中，還包括將所述富含長春花生物堿的細(xì)胞用溶劑萃取獲得長春花生物堿；所述溶劑為甲醇和/或乙酸乙酯。