本發(fā)明公開了一種提高生產(chǎn)2-KLG發(fā)酵產(chǎn)量的葡萄糖酸桿菌及其應(yīng)用，通過基因工程技術(shù)，將來源于G.oxydans的pqqA及pqqABCDE基因，分別表達于本實驗室構(gòu)建的由山梨醇生產(chǎn)2-KLG的G.oxydans一步工程菌中，解除小菌對伴生菌依賴的問題，實現(xiàn)了從D-山梨醇到2-KLG的直接轉(zhuǎn)化，簡化了維生素C生產(chǎn)工藝，為了進一步提高2-KLG的產(chǎn)量，將PQQ合成的關(guān)鍵基因pqqA及基因簇pqqABCDE分別表達于G.oxydans一步工程菌中，2-KLG的產(chǎn)量最高可達51.8g/L，較未表達PQQ的一步工程菌提高了60％。

1.一種提高2-KLG發(fā)酵產(chǎn)量的葡萄糖酸桿菌(Gluconobacter?oxydans)工程菌，其特征在于將pqqABCDE，或pqqA及pqqABCDE同時表達于G.?oxydans一步工程菌中，所述G.?oxydans一步菌中表達質(zhì)粒pGUC-tufB-sdh-GS-sndh，工程菌的構(gòu)建過程如下：對K.?vulgare?WSH-001的全基因組測序結(jié)果中注釋的sdh及sndh通過連接肽GGGGS融合后連接到pMD19-T測序，同時將來源于G.?oxydans的強啟動子tufB進行擴增連接到克隆載體pMD19-T測序，獲得正確的轉(zhuǎn)化子后進行雙酶切連接到E.coli-G.oxydans穿梭質(zhì)粒載體pGUC1，得到重組質(zhì)粒載體pGUC-tufB-sdh-GS-sndh；再將K.?vulgare?WSH-001的全基因組測序結(jié)果中注釋的pqqA及pqqABCDE，分別獲得基因，連接到克隆載體pMD19-T測序，獲得正確的轉(zhuǎn)化子后進行雙酶切連接到質(zhì)粒pGUC-tufB-sdh-GS-sndh上，構(gòu)建得到pGUC-tufB-sdh-GS-sndh-pqqA、pGUC-tufB-sdh-GS₂-sndh-pqqABCDE，將構(gòu)建好的重組表達載體轉(zhuǎn)化E.coli?JM109，菌落PCR驗證陽性轉(zhuǎn)化子；再將來源于G.?oxydans?WSH-003的tufB啟動子序列擴增后克隆到pMD19-T測序，獲得正確的轉(zhuǎn)化子后雙酶切連接到pGUC-tufB-sdh-GS-sndh-pqqA、pGUC-tufB-sdh-GS₂-sndh-pqqABCDE，構(gòu)建得到pGUC-tufB-sdh-GS-sndh-tufB-pqqA、pGUC-tufB-sdh-GS₂-sndh-tufB-pqqABCDE，轉(zhuǎn)化E.coli?JM109后菌落PCR驗證陽性轉(zhuǎn)化子，再通過三親本雜交的方法將重組表達載體轉(zhuǎn)移至G.?oxydans?WSH-003中；所述pqqA基因核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1，所述pqqABCDE基因核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。2.權(quán)利要求1所述基因工程菌在生產(chǎn)2-KLG中的應(yīng)用。