本發明公開了一種重組戊型肝炎疫苗抗原P179蛋白的發酵制備方法，包括以下步驟：A，培養工程菌株，并制備基礎培養基和補料培養基；B，滅菌處理后，接入工程菌株；C，監測所工程菌株的OD600值，當OD600的值為40～80時，加入誘導劑進行誘導；D，當所述OD600的值至少提高百分之五時，進行收菌；E，離心提純后，即得P179蛋白；在整個過程中實時監測基礎培養基中葡萄糖的含量，當葡萄糖的含量少于預定值時，增加補料培養基。本發明通過大腸桿菌HEV179/BL21(DE3)以可溶性形式表達重組戊型肝炎疫苗抗原P179蛋白，并可自主包裝成粒徑為18~20nm的VLP顆粒。所述VLP顆粒具有良好的免疫原性。該發酵工藝穩定、簡單、易于產業化。

1.一種重組戊型肝炎疫苗抗原P179蛋白的發酵制備方法，包括以下步驟：A，培養工程菌株，并制備基礎培養基和補料培養基；B，所述基礎培養基經過滅菌處理后，接入所述工程菌株；C，監測所述工程菌株的細菌細胞密度OD600，當所述OD600的值為40～80時，在基礎培養基中加入誘導劑進行誘導；D，當所述OD600的值至少提高百分之五時，進行收菌；E，離心提純后，即得P179蛋白；在所述步驟B~D過程中，實時監測基礎培養基中葡萄糖的含量，當葡萄糖的含量少于預定值時，增加補料培養基，使得葡萄糖的含量等于或大于所述預定值；步驟A中的所述基礎培養基的配方為：葡萄糖30~50g，酵母粉90~100g，蛋白胨200~250g，NaCl?80~100g，MgSO₄?8~15g，消泡劑2~5ml，KH₂PO₄?35~45g，Na₂HPO₄·12H₂O?120~150g，加蒸餾水定容至20L；所述預定值為0.1%；保持葡萄糖含量在0.1%-0.2%之間；工程菌菌體達到對數生長期末期開始誘導；步驟A中的所述基礎培養基的配方還包括微量元素?30~50ml，所述微量元素的配方為：FeSO₄·7H₂O?0.1~0.2g，CaC1₂·2H₂O?0.025~0.05g，ZnSO₄·7H₂O?0.0225~0.05g，MnSO₄·H₂O?0.001~0.005g，Na₂MoO₄·2H₂O?0.001~0.005g，Na₂B₄O₇·12H₂O?0.0002~0.0005g，CuSO₄·5H₂O?0.01~0.04g，CoCl₂·6H₂O?0.001~0.005g，加蒸餾水定容至1L；所述補料培養基的配方為A配方，所述A配方為：葡萄糖230~250g，MgSO_4?3~5g，加蒸餾水定容至1L；步驟B中，當采用空氣為氣源時，接入菌株后，發酵起始罐壓為0.5bar，起始pH值為7.0；控制溶氧量不低于30%，且不高于60%；步驟B中，當采用純氧為氣源時，接入菌株后，發酵起始罐壓為0.5bar，起始pH值為7.0，控制溶氧量不低于40%；步驟C中，當采用空氣為氣源時，在所述OD600的值為40～50時，加入誘導劑IPTG進行誘導；所述OD600的值為55～65時，進行收菌；步驟C中采用純氧為氣源時，所述OD600的值為60～75時，加入誘導劑IPTG進行誘導；所述OD600的值為80～100時，進行收菌；目的蛋白表達量不低于15%，可溶性蛋白占總目的蛋白的90%以上，表達產物自主形成粒徑為18-20nm的VLP顆粒；步驟A所述工程菌株為大腸桿菌HEV179/BL21(DE3)，該工程菌株由pET28a-P179重組質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3)，經克隆篩選獲得，所述重組戊型肝炎疫苗抗原P179蛋白是基于Ⅳ型戊型肝炎病毒中國株的蛋白片段，該蛋白片段為HEV?ORF2編碼的453~631位氨基酸，具體氨基酸序列如說明書核苷酸和氨基酸序列表中序列1所示。2.如權利要求1所述的重組戊型肝炎疫苗抗原P179蛋白的發酵制備方法，其特征在于，在所述步驟B~D過程中，保持溫度在35～38℃之間。3.如權利要求1所述的重組戊型肝炎疫苗抗原P179蛋白的發酵制備方法，其特征在于，所述誘導劑為IPTG，IPTG的濃度為0.2~1.0mmol/L，誘導時間為4~7小時。