本發(fā)明公開(kāi)了一種羧甲基化五味子多糖及其制備方法和應(yīng)用，屬于多糖改性技術(shù)領(lǐng)域。該羧甲基化五味子粗多糖的得率為88.37±1.65%，羧甲基化取代度為0.724±0.022，溶解度為0.5±0.04 mg/mL，是原五味子多糖溶解度的5倍。羧甲基化五味子多糖的溶解度為12.5±0.26 mg/mL，分子量為3.4×10 Da，單糖組成為：甘露糖、葡萄糖和半乳糖，其摩爾比為1:44.84:3.71。本發(fā)明反應(yīng)溫度在40?80°C、反應(yīng)時(shí)間在1?8 h，氯乙酸終濃度在0.005?0.08 g/mL的條件下，所得羧甲基化五味子多糖的得率和取代度均較高，水溶性好，且對(duì)持久性有機(jī)污染物PCB126致小鼠免疫抑制有顯著的改善作用，可提高小鼠脾臟和胸腺指數(shù)，增加血清中TNF?α、IFN?γ和IL?2的水平，可作為免疫增強(qiáng)劑，用作功能食品和食品添加劑。

1.一種羧甲基化五味子多糖，其特征在于：所述羧甲基化五味子多糖的分子量為1.698
×10⁴ Da，所述羧甲基化五味子多糖的單糖組成為：甘露糖、葡萄糖和半乳糖，摩爾比為1:
44.84:3.71，所述羧甲基化五味子多糖的溶解度為12.24-12.76 mg/mL，所述羧甲基化五味
子多糖在水溶液中呈聚集狀形成分子鏈，所述分子鏈的厚度為0.1-1 nm；
按照下述步驟進(jìn)行：
（1）五味子粗多糖的制備：將新鮮五味子于55-65℃烘箱內(nèi)干燥12-24h后進(jìn)行粉碎，采
用石油醚對(duì)干燥后的五味子進(jìn)行回流脫脂2-3次，然后將脫脂后的五味子藥渣以料液比1:
10-1:15加入蒸餾水進(jìn)行水提，取2-3次得到五味子多糖提取液，五味子多糖提取液經(jīng)減壓
濃縮，采用80%的乙醇醇沉3-4次，得到的醇沉物經(jīng)離心后，復(fù)溶、揮醇，經(jīng)截留分子量為3000
Da的透析袋透析12-36h，真空干燥2-3h得到五味子粗多糖；
（2）五味子多糖的羧甲基化：將五味子粗多糖溶于異丙醇溶液中，機(jī)械攪拌使其充分溶
解，五味子粗多糖和異丙醇料液比為1:30 - 1:40（g/mL），溶解溫度為20-25℃，攪拌時(shí)間為
15-20 min，攪拌速度為60-240 r/min，向溶解后的五味子多糖溶液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15-
20%的NaOH溶液進(jìn)行堿化，NaOH溶液的加入量為異丙醇體積的20-30%，堿化溫度為20-25℃，
堿化時(shí)間為1-2 h，然后在攪拌狀態(tài)下繼續(xù)向堿化后的五味子粗多糖反應(yīng)液中加入氯乙酸
進(jìn)行羧甲基化，氯乙酸加入量為0.005-0.08 g/mL，水浴溫度為40-80℃，羧甲基化反應(yīng)時(shí)間
為1-8 h，待反應(yīng)液冷卻后調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH至中性，采用乙醇醇沉，離心后得到醇沉產(chǎn)物，將醇
沉產(chǎn)物采用少量蒸餾水復(fù)溶后進(jìn)行透析，透析結(jié)束后進(jìn)行真空干燥得到羧甲基化五味子粗
多糖；
（3）純化：將步驟（2）得到的羧甲基化五味子粗多糖溶解于0.05-0.1mol/L 的NaCl溶液
中，然后緩慢滴加至DEAE-52層析柱中，并采用0.05-0.2 mol/L的NaCl溶液進(jìn)行梯度洗脫，
繪制洗脫曲線，根據(jù)洗脫曲線分別收取合并洗脫液，得到羧甲基化五味子多糖不同組分，選
取0.05mol/L NaCl的洗脫組分合并，經(jīng)截留分子量為3000 Da的透析袋透析、真空干燥后，
得到羧甲基化五味子多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羧甲基化五味子多糖，其特征在于：所述步驟（1）中五味子粗
多糖的得率為15.9-19.8%，多糖含量為54.4-65.7%，溶解度為0.08-0.12 mg/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羧甲基化五味子多糖，其特征在于：所述步驟（2）中羧甲基化
五味子粗多糖的得率為60.2-86.4%，羧甲基化取代度為0.41-0.71，溶解度為0.46-0.54
mg/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羧甲基化五味子多糖，其特征在于：所述步驟（1）中回流脫脂
的溫度為70-80℃，脫脂時(shí)間為1-2 h，水提溫度為90-100℃，提取時(shí)間為4-6 h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羧甲基化五味子多糖，其特征在于：所述步驟（2）中采用80%乙
醇醇沉24-48h，醇沉液以4000-5000rpm轉(zhuǎn)速離心5-10 min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羧甲基化五味子多糖，其特征在于：所述步驟（2）中采用經(jīng)截
留分子量為3000 Da的透析袋透析首先采用流水透析，最后進(jìn)行蒸餾水透析，流水透析時(shí)間
為36-48h，蒸餾水透析時(shí)間為24-36h。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羧甲基化五味子多糖，其特征在于：所述步驟（2）中真空干燥
時(shí)間為2-3h，溫度為20-25℃，真空度為-0.085 - -0.1Mpa。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羧甲基化五味子多糖，其特征在于：所述步驟（3）中羧甲基化
五味子粗多糖在NaCl溶液中經(jīng)震蕩加熱溶解，震蕩水浴的溫度為50-60℃，震蕩頻率為120-
160 次/分，震蕩溶解的時(shí)間10-12h，然后對(duì)溶解后的溶液進(jìn)行離心分離，溶液離心的轉(zhuǎn)速
為：4000-5000 r/min，離心時(shí)間為8-10 min；
所述步驟（3）中流水透析時(shí)間為36-48h，蒸餾水透析時(shí)間為24-36h，真空干燥時(shí)間為2-
3h，真空干燥溫度為20-25℃，真空干燥的真空度為-0.085 - -0.1MPa。
9.權(quán)利要求1所述羧甲基化五味子多糖的應(yīng)用，其特征在于：所述羧甲基化五味子多糖
能夠作為免疫增強(qiáng)劑用于功能食品和食品添加劑中。