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一種血管活性腸肽的融合蛋白及其制備方法和應用

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-02-04
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201410805897.5 
  • 技術(專利)名稱 一種血管活性腸肽的融合蛋白及其制備方法和應用 
  • 項目單位 蘭州大學
  • 發明人 李紅玉,李加忠,朱紅梅,支德娟,李洋,高江利,張麗蕓,王亞軍 
  • 行業類別 藥品-化學藥品
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 王藝帷
  • 發布時間 2022-02-04  
  • 01

    項目簡介

    本發明屬于基因工程制藥領域,具體涉及一種血管活性腸肽的融合蛋白,所述融合蛋白包含1個人血清白蛋白(Albumin Human,HSA)和1個血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide,VIP),該融合蛋白所具有的獨特的氨基酸序列可以保證其在宿主體內高水平穩定表達,在保留VIP原有功能的同時,體內半衰期顯著延長。本發明同時提供該融合蛋白的制備方法及其在制備抗炎、抗損傷、腦血管疾病、提高睡眠質量的藥物中的應用。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種血管活性腸肽的融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白包含一個人血清白蛋白
    (Albumin human,HSA)、一個血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)和一個
    連接肽,HSA通過連接肽與VIP連接;所述VIP位于融合蛋白的N-末端,HSA位于融合蛋白的C-
    末端,融合蛋白用結構式表示為VIP-L1-HSA,其中L1表示連接肽,L1的DNA序列為
    GGCGGTGGCGGCAGCGGTGGCGGC,氨基酸序列為Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly。
    2.一種血管活性腸肽的融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白包含一個人血清白蛋白
    (Albumin human,HSA)、一個血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)和一個
    連接肽,所述VIP位于融合蛋白的C-末端,HSA位于融合蛋白的N-末端,融合蛋白用結構式表
    示為HSA-L2-VIP,其中L2表示連接肽,L2的DNA序列為GGTGGTGGCGGCAGC,氨基酸序列為Gly-
    Gly-Gly-Gly-Ser。
    3.根據權利要求1所述的一種血管活性腸肽的融合蛋白,其特征在于,所述VIP的氨基
    酸序列如SEQ ID NO:2所示,編碼所述VIP的氨基酸序列的DNA序列如SEQ ID NO:1所示。
    4.根據權利要求1所述的一種血管活性腸肽的融合蛋白,其特征在于,所述HSA的氨基
    酸序列如SEQ ID NO:4所示,編碼所述HSA的氨基酸序列的DNA序列如SEQ ID NO:3所示。
    5.根據權利要求2所述的一種血管活性腸肽的融合蛋白,其特征在于,所述VIP的氨基
    酸序列如SEQ ID NO:8所示,編碼所述VIP的氨基酸序列的DNA序列如SEQ ID NO:7所示。
    6.根據權利要求2所述的一種血管活性腸肽的融合蛋白,其特征在于,所述HSA的氨基
    酸序列如SEQ ID NO:10所示,編碼所述HSA的氨基酸序列的DNA序列如SEQ ID NO:9所示。
    7.根據權利要求1所述的一種血管活性腸肽的融合蛋白,其特征在于所述融合蛋白采
    用酵母細胞表達制備。
    8.根據權利要求7所述的一種血管活性腸肽的融合蛋白,其特征在于所述的酵母為嗜
    甲醇畢赤酵母(Pichiapastoris)。
    9.一種如權利要求1所述的血管活性腸肽的融合蛋白的制備方法,其特征在于,所述方
    法包含以下步驟:
    ①全基因合成VIP序列;
    ②通過PCR擴增獲取HSA序列;
    ③通過限制性內切酶酶切、連接并轉化大腸桿菌,獲得含編碼所述血管活性腸肽的融
    合蛋白的氨基酸序列的DNA序列的重組表達載體;
    ④將步驟③所述的重組表達載體轉化到感受態大腸桿菌TOP10,再轉化到宿主表達系
    統進行表達,即得所述融合蛋白。
    10.根據權利要求9所述的制備方法,其特征在于,步驟④所述宿主表達系統是酵母。
    11.根據權利要求10所述的制備方法,其特征在于,所述的酵母為嗜甲醇畢赤酵母。
    12.一種如權利要求2所述的血管活性腸肽的融合蛋白的制備方法,其特征在于,所述
    方法包含以下步驟:
    (1)所述血管活性腸肽的融合蛋白的動物表達載體的構建
    ①全基因合成VIP序列;
    ②通過PCR擴增獲取HSA序列;
    ③通過限制性內切酶酶切、連接并轉化大腸桿菌,獲得含編碼所述血管活性腸肽的融
    合蛋白的氨基酸序列的DNA序列的重組動物表達載體;
    (2)所述血管活性腸肽的融合蛋白的酵母表達載體的構建
    ①通過PCR擴增步驟(1)③中重組動物表達載體獲取HSA-L2-VIP;
    ②通過限制性內切酶酶切酵母表達載體;
    ③使用融合PCR技術連接(2)①中HSA-L2-VIP與(2)②中酵母表達載體,并轉化大腸桿
    菌,獲得含編碼所述血管活性腸肽的融合蛋白的氨基酸序列的DNA序列的重組酵母表達載
    體;
    (3)將步驟(2)③所述的重組酵母表達載體轉化到感受態大腸桿菌TOP10,再轉化到酵
    母中進行表達,即得所述融合蛋白。
    13.根據權利要求12所述的制備方法,其特征在于,所述的酵母為嗜甲醇畢赤酵母。
    14.一種含有編碼如權利要求1-6和8中任意一項所述的血管活性腸肽的融合蛋白氨基
    酸序列的DNA序列的重組表達載體。
    15.一種含有權利要求14所述的重組表達載體的宿主表達系統。
    16.權利要求1-6和8中任意一項所述的血管活性腸肽的融合蛋白在制備抗炎、抗損傷、
    腦血管疾病、提高睡眠質量的藥物中的應用。
    17.權利要求1-6和8中任意一項所述的血管活性腸肽的融合蛋白在制備治療哮喘藥物
    中的應用。
    展開

專利技術附圖

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