1.一種通過添加大分子擁擠試劑高效體外生物生產蛋白質的組合物，其特征是包括：體積比為10：15：1：0.5的用于生產蛋白質的細胞提取物；用于生產蛋白質的外加反應物；用于生產蛋白質的基因質粒pRset-CFP和濃度為10mg/ml重均分子質量為8000的聚乙二醇水溶液；所述用于生產蛋白質的細胞提取物包括比例為1g:0.01ml:1ml的麥胚細胞破碎產物、緩沖溶液1和緩沖溶液2；所述緩沖溶液1為：5mmol/L三羥甲基氨基甲烷，30mmol/L谷氨酸鉀，10mmol/L谷氨酸鎂，0.5mmol/L二硫蘇糖醇，5mmol/L 2-巰基乙醇；溶劑是去離子水；所述緩沖溶液2為：5mmol/L三羥甲基氨基甲烷，30mmol/L谷氨酸鉀，10mmol/L谷氨酸鎂，0.5mmol/L二硫蘇糖醇；溶劑是去離子水；所述用于生產蛋白質的外加反應物由按體積比為2:20:2:1的氨基酸混合液、反應緩沖液、能量補充液和濃度為5μg/ml的核糖核酸聚合酶水溶液組成：所述氨基酸混合液，溶劑為去離子水；每種氨基酸的濃度均為5mmol/L的等摩爾濃度，所述氨基酸包括：甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸、組氨酸；所述反應緩沖液包括：40mmol/L4-羥乙基哌嗪乙磺酸、80mmol/L谷氨酸鉀、10mmol/L谷氨酸鎂、10mmol/L 3-磷酸甘油酸、5mmol/L環磷酸腺苷、2mmol/L煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、1mmol/L輔酶A、0.4mmol/L亞葉酸、1mg/mL轉運核糖核酸、0.4mmol/L亞精胺；溶劑是去離子水；所述能量補充液包括：1mmol/L三磷酸尿苷，1mmol/L三磷酸胞苷，1mmol/L三磷酸腺苷，3mmol/L三磷酸鳥苷，溶劑是去離子水。2.一種通過添加大分子擁擠試劑高效體外生物生產蛋白質的方法，其特征是包括如下步驟：將體積比為10：15：1：0.5的用于生產蛋白質的細胞提取物、用于生產蛋白質的外加反應物、用于生產蛋白質的基因質粒pRset-CFP和濃度為10mg/ml重均分子質量為8000的聚乙二醇水溶液混合，置于恒溫反應容器中，在37℃放置10min；所述用于生產蛋白質的細胞提取物包括比例為1g:0.01ml:1ml的麥胚細胞破碎產物、緩沖溶液1和緩沖溶液2；所述緩沖溶液1為：5mmol/L三羥甲基氨基甲烷，30mmol/L谷氨酸鉀，10mmol/L谷氨酸鎂，0.5mmol/L二硫蘇糖醇，5mmol/L 2-巰基乙醇；溶劑是去離子水；所述緩沖溶液2為：5mmol/L三羥甲基氨基甲烷，30mmol/L谷氨酸鉀，10mmol/L谷氨酸鎂，0.5mmol/L二硫蘇糖醇；溶劑是去離子水；所述用于生產蛋白質的外加反應物由按體積比為2:20:2:1的氨基酸混合液、反應緩沖液、能量補充液和濃度為5μg/ml的核糖核酸聚合酶水溶液組成：所述氨基酸混合液，溶劑為去離子水；每種氨基酸的濃度均為5mmol/L的等摩爾濃度，所述氨基酸包括：甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸、組氨酸；所述反應緩沖液包括：40mmol/L4-羥乙基哌嗪乙磺酸、80mmol/L谷氨酸鉀、10mmol/L谷氨酸鎂、10mmol/L 3-磷酸甘油酸、5mmol/L環磷酸腺苷、2mmol/L煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、1mmol/L輔酶A、0.4mmol/L亞葉酸、1mg/mL轉運核糖核酸、0.4mmol/L亞精胺；溶劑是去離子水；所述能量補充液包括：1mmol/L三磷酸尿苷，1mmol/L三磷酸胞苷，1mmol/L三磷酸腺苷，3mmol/L三磷酸鳥苷，溶劑是去離子水。
展開
